[發(fā)明專利]一種末梢微量血維生素D質(zhì)譜檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010813621.7
• 申請日: 2020-08-13
• 公開（公告）號: CN111983071A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設計）人: 余曉丹;焦先婷
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫(yī)學院附屬上海兒童醫(yī)學中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 上海波拓知識產(chǎn)權代理有限公司 31264
• 代理人: 孫燕娟

本發(fā)明涉及一種末梢微量血維生素D質(zhì)譜檢測方法，包括血清標本收集、準備檢測材料和化學制品、校準標準品、靜脈血清、微量血清25?羥基維生素D檢測方法、數(shù)據(jù)分析、HPLC?MS/MS方法的分析性能評價、靜脈和微量血HPLC?MS/MS分析方法的結(jié)果驗證、靜脈和微量血中25?羥基維生素D水平、靜脈和微量血標本中25?羥基維生素D濃度結(jié)果比較。優(yōu)點在于：通過同時采集同一對象的微量血和常量血，用高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測常量血和微量血25?羥基維生素D水平，采用直線回歸分析法分析兩者25?羥基維生素D的相關性及轉(zhuǎn)換系數(shù)，從而得出轉(zhuǎn)換公式；可以通過公式將常量血和微量血25?羥基維生素D濃度相互轉(zhuǎn)換；為臨床上用微量血取代常量血進行VitD檢測提供可靠依據(jù)。

技術領域

本發(fā)明涉及末梢微量血維生素D檢測技術領域，特別是涉及一種末梢微量血維生素D質(zhì)譜檢測方法。

背景技術

維生素D是一種脂溶性維生素，具有類固醇激素的功能。維生素D(VitD)缺乏是兒童健康面臨的重大公共衛(wèi)生問題。

研究表明：6-12月齡嬰兒VitD缺乏不足率高達35％-40％。維生素D缺乏診斷標準是依據(jù)血清中的25-羥基維生素D濃度。目前國際公認液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法是檢測25-羥基維生素D最可靠的方法，具有很高的靈敏度、特異性和準確性，并且可同時測定血清25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3濃度。

臨床上測定血清VitD通常需采集靜脈血(常量血)，由于低齡兒童尤其是新生兒及嬰幼兒的血管比較細，常規(guī)采取靜脈血的過程中會哭鬧等，依從性差，且家長顧慮孩子年齡小，不愿意一次抽取2mL的靜脈血，常規(guī)采集靜脈血比較困難。因此，采取微量血進行檢測，可以緩解兒童采血過程的痛苦，提高患者和家長的依從性。

但由于微量血采集受采血部位深淺、組織液干擾等因素影響，與常量血檢測結(jié)果有差異，目前尚無法用微量血方法來檢測25-羥基維生素D。

前面的敘述在于提供一般的背景信息，并不一定構(gòu)成現(xiàn)有技術。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種末梢微量血維生素D質(zhì)譜檢測方法，該方法在傳統(tǒng)用HPLC-MS/MS測定靜脈常量血清中25-羥基維生素D的基礎上，建立了HPLC-MS/MS法測定手指微量血中25-羥基維生素D的新方法；簡便、快速、靈敏度高、干擾少、準確度和重現(xiàn)性好；為臨床上用微量血取代常量血進行VitD檢測提供可靠依據(jù)。

本發(fā)明提供一種末梢微量血維生素D質(zhì)譜檢測方法，所述末梢微量血維生素D質(zhì)譜檢測方法包括以下步驟：

(1)血清標本收集：

靜脈血樣本通過靜脈穿刺進入含有凝血激活劑的試管；取指尖血放入EP試管中，再向EP試管中加入抗凝劑乙二胺四乙酸(EDTA)，血清分離，在-20℃避光中保存；

(2)準備檢測材料和化學制品：

25-羥基維生素D2(100μg/mL，purity98％)、25-羥基維生素D3(100μg/mL，purity98％)、25-羥基維生素D2-d3(25-羥基維生素D2的內(nèi)標，100μg/mL，purity98％)、25-羥基維生素D3-d6(25-羥基維生素D3的內(nèi)標，0.5mg，purity95％)、甲酸、標準物質(zhì)(SRM2972、SRM 972a)、有機溶劑正己烷和甲醇(高效液相色譜級)、硫酸鋅(ZnSO4)；

(3)校準標準品：

在甲醇濃度為6.25/6.25、12.5/12.5、25/25、50/50、125/125、250/250和500/500nmol/L(25-羥基維生素D2/25-羥基維生素D3)時制備混合校準標準品，每批校準品均作為樣品處理；

(4)靜脈血清、微量血清25-羥基維生素D檢測方法：