[發明專利]一種卵母細胞體外成熟培養方法

有效

• 申請號: 202010799096.8
• 申請日: 2019-09-03
• 公開（公告）號: CN112048017B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 趙純;楊燁;凌秀鳳;張軍強;曹善仁;張笑蘭;于曉寧
• 申請（專利權）人: 南京市婦幼保健院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N5/075
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

本發明公開了一種卵母細胞體外成熟培養方法。一種卵母細胞體外成熟培養方法，其特征在于使用包含氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的分泌型內源性多肽PDFF?CO3的卵母細胞體外成熟培養試劑對卵母細胞進行體外培養或者在卵母細胞體外成熟培養液中添加氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的分泌型內源性多肽PDFF?CO3。小鼠GV期卵細胞培養液中加入PDFF?CO3，有促進卵細胞成熟的生物學功能；因此，PDFF?CO3可以在制備促進卵細胞成熟及提高卵細胞發育潛能的藥物、制備培養液中應用。

分案說明

本發明是申請日為2019-9-3,申請號為2019108274356,發明名稱為一種分泌型內源性多肽PDFF-CO3及其應用的中國發明專利申請的分案申請.

技術領域

本發明屬于輔助生殖技術領域，涉及一種分泌型內源性多肽PDFF-CO3及其應用。

背景技術

卵母細胞體外成熟培養(IVM)是一種在不經超排卵或應用少量Gn后，從卵巢獲取未成熟卵母細胞，在體外適應的條件下進行培養，使得卵母細胞成熟并具備受精能力的技術。作為一種輔助生育的熱點前沿技術，盡管其在治療多囊卵巢綜合征(PCOS)、卵巢高/低反應、卵巢反應不齊、供卵、婦女生育力保存等多個領域有廣闊的應用前景，然而相關研究統計表明，當前卵母細胞體外成熟培養體系并未完善，表現為成熟率較低，發育潛能差等，目前臨床妊娠率僅在20-35％，成為其臨床應用的主要瓶頸。因此提高IVM成功率是近年來輔助生殖技術領域研究的關鍵。在卵母細胞體外成熟研究中，IVM培養液的成分直接影響卵母細胞的成熟率及其后的卵裂與胚胎發育。經過多年的研究，國內外學者逐漸發現在IVM培養液中添加促性腺激素、甾體激素、抗氧化劑、減數分裂抑制劑、生長因子等，使IVM培養系統得到不斷優化，改善了培養效果，但是目前提高卵母細胞成熟率和改善卵母細胞發育潛能的效果還不能令人滿意。尋找安全、有效的IVM培養液添加成分來促進卵母細胞體外成熟及發育潛能是當前重要的研究方向。

卵泡液中一些蛋白或肽含量的變化或修飾的改變能夠精確反應卵泡發育成熟的生理過程，因此卵泡液成為研究卵泡發育的獨特窗口。然而由于卵泡液中成分復雜，不僅含有理想的促卵母細胞成熟的成分，還含有抑制卵母細胞成熟的物質如卵泡抑素、成熟抑制因子等，不利于研究單因素對卵母細胞體外成熟的影響，因而鑒定卵泡液中促進卵母細胞成熟及改善卵母細胞發育潛能的因子以優化IVM培養體系或許會給我們帶來更多驚喜。近年來，小分子多肽在生物體內的功能受到越來越多的重視，它們參與調控人體內各種各樣的生理和病理過程，如：多肽通過調控生長素分泌來調節細胞的分泌，通過調控各種信號通路來影響細胞的生長、分化和凋亡等。近年來，小分子多肽在卵母細胞成熟過程中的功能受到生殖研究者的普遍關注，如：Zhang M等發現C型鈉肽(CNP)是卵泡內維持卵母細胞減數分裂阻滯的關鍵物質，在鼠、牛、山羊、豬等不同哺乳動物卵子體外成熟培養液中加入CNP，能夠促進卵子成熟，提高體外受精率及囊胚形成率。由于：①研究發現，細胞自然產生的一些內源性多肽具有分泌極性，能被分泌到體液中參與疾病的發生發展；②卵泡液中一些關鍵多肽含量的變化能夠預測卵母細胞的發育潛能；③小分子多肽具有穩定性強，毒副作用小，特異性高等優點，已廣泛應用于臨床藥物開發，因此從尋找卵泡液中分泌型多肽的角度來挖掘改善IVM培養基的成分給我們提供了新的研究線索。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供一種分泌型內源性多肽PDFF-CO3。

本發明的另一目的是提供該分泌型內源性多肽PDFF-CO3的應用。

本發明的目的可通過以下技術方案實現：

一種分泌型內源性多肽PDFF-CO3，其特征在于氨基酸序列如SVQLTEKRMDKVGKYPKELRKCCED(SEQ ID NO.1)所示。

本發明所述的分泌型內源性多肽PDFF-CO3在卵母細胞體外成熟培養中的應用。