[發明專利]一種新冠病毒抗體檢測熒光試劑與制備方法

有效

• 申請號: 202010796340.5
• 申請日: 2020-08-10
• 公開（公告）號: CN112034179B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 劉歡;徐可;李華曜;翟博慧;龍文博;李龍;胡志響;陳浩
• 申請（專利權）人: 華中科技大學;武漢大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/533
• 代理公司: 華中科技大學專利中心 42201
• 代理人: 許恒恒;李智

本發明屬于病毒抗體檢測技術領域，公開了一種新冠病毒抗體檢測熒光試劑與制備方法，其中制備方法包括以下步驟：(1)合成可見光熒光膠體量子點；(2)在可見光熒光膠體量子點的表面標記預先準備的新冠病毒特異性抗原多肽，得到量子點熒光試劑。本發明基于抗原抗體結合免疫反應引起量子點熒光峰值波長或強度改變，可利用熒光計或光譜儀進行自動化檢測，實現高靈敏、高特異性、高通量的新冠病毒抗體的檢測與定量分析。

技術領域

本發明屬于病毒抗體檢測技術領域，更具體地，涉及一種新冠病毒抗體檢測熒光試劑與制備方法。

背景技術

快速、準確的病毒檢測方法對于實現病毒感染人群的早發現、早隔離、早診斷、早治療具有重要意義。以COVID-19新型冠狀病毒為例，因其快速繁殖、長潛伏期、高傳染性等特點，已在全球范圍內引起大規模人群感染事件，對個人安全、社會穩定造成了嚴重的危害。因此，發展新冠病毒抗體快速檢測方法，實現對病毒攜帶患者快速、準確的診斷對疾病防控與治療至關重要。

膠體金試劑盒/試紙條作為病毒快速檢測的主流方法之一，利用免疫層析法對上呼吸道分泌物或血清樣本中的抗原或抗體進行檢測，通過包被不同膠體金標記物的測試線處的顯色反應來判定檢測結果。中國發明專利說明書CN111257555A中公開了新冠病毒核酸重組酶介導等溫擴增側向層析膠體金快速檢測方法及試紙條，利用核酸重組酶介導等溫擴增技術，并在金標結合墊上噴涂有膠體金標記的鼠抗異硫氰熒光素抗體，可用于新冠病毒的檢測。膠體金試劑盒/試紙條檢測適用于各類樣本，同時操作簡單、成本較低，上述方法主要基于膠體金本身的顏色顯色，膠體金本身不是一種發光材料，因而對于低濃度樣品顯色淺，靈敏度較低，通過人眼讀取無法對目標檢測物進行定量分析，影響檢測結果的準確性。

酶聯免疫吸附測定(ELISA)法是實現病毒定量檢測的重要方法之一，首先需要將抗原或抗體結合至固相載體表面并保證免疫活性，進行酶鏈接得到酶標抗原或抗體與受檢樣本中的待測物特異性結合，利用酶的高催化效率，進一步對底物顏色進行分析得到酶標物的數量并最終通過間接法實現待測物的定量分析。中國發明專利說明書CN111122864A中公開了新型冠狀病毒IgG抗體酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法，利用預包被新冠病毒抗原的包被板與酶標稀釋液按工作濃度配制的羊抗人IgG-HRP工作液，用于判定是否存在新型冠狀病毒IgG抗體。ELISA法檢測步驟繁瑣，需經過復雜的樣本預處理過程，過程中需保證酶的催化活性，對樣本預處理與檢測過程都提出了較高的要求，不適用于現場快速檢測。

上述方法均利用了待測物與能夠與其特異性結合的抗原或抗體間的免疫反應，但完整的蛋白質合成需要通過對表達所對應DNA序列的判斷選取與精準測序，并在生物細胞內輔助完成翻譯、加工、包裝修飾等步驟。步驟復雜，影響因素眾多，因此常用多肽來代替蛋白質進行疫苗研制、試劑開發等工作。但由于其分子量遠小于蛋白質，缺乏空間構象，在免疫反應中特異性有所不足。同時其較于抗原蛋白尺寸略小，與膠體金尺寸失配，不適用于開發膠體金試劑盒/試劑條。另一方面，熒光材料如有機染料、量子點等常用于各類蛋白質等生物分子標記、成像應用，同時許多研究關注熒光材料的激發態傳感特性。利用熒光材料進行各類生物分子、重金屬離子、氣體分子的檢測應用。但常見熒光染料如共軛聚合物物及熒光染料等往往合成路線復雜且穩定性較差，導致其在熒光檢測應用中存在困難；而熒光量子點材料作為零維無機半導體材料，具有優異的發光特性同時具有高穩定性，同時其熒光傳感靈敏度高，適用于新冠病毒熒光檢測試劑的開發。

發明內容