[發明專利]一種細胞處理的方法及其在甘露聚糖肽合成中的應用

在審

• 申請號: 202010792642.5
• 申請日: 2020-08-09
• 公開（公告）號: CN111849855A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 王樂;沙宇;袁其朋;王新
• 申請（專利權）人: 河南工業大學
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/20;C12P21/02;C12R1/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開一種細胞處理的方法及其在甘露聚糖肽合成中的應用，通過加入不同種類的試劑，同時采用微波協同超聲波輔助處理細胞的方式轉化合成甘露聚糖肽。將試劑的濃度控制在57 mg/L~398 mg/L范圍內，并于發酵后的第0~40個小時加入發酵培養基中進行處理，結合控制微波協同超聲波輔助處理過程中的處理時間、中間間隔次數、間隔時間、功率等參數獲得細胞，隨后將處理后的細胞應用于發酵合成甘露聚糖肽，對提取所得的甘露聚糖肽利用萘酚?硫酸法檢測其產量。相比于未經處理的細胞，處理后的細胞在發酵合成甘露聚糖肽的過程可顯著將其產量提升至少85%以上。

技術領域

本發明涉及微生物發酵領域，特別涉及一種細胞處理的方法及其在甘露聚糖肽合成中的應用。

背景技術

甘露聚糖肽（曾用名：多抗甲素）是由甲型溶血性鏈球菌經深層發酵、分離純化所得糖肽類物質。作為一種新型的生物免疫增強劑，甘露聚糖肽在臨床上常用于治療免疫功能低下或者免疫障礙性疾病，以及腫瘤的輔助治療。

目前，甘露聚糖肽的研究主要集中在發酵過程的調控以及臨床應用。專利號CN104404114 B公開了一種甘露聚糖肽的發酵工藝及其應用，通過改進菌種的接種、濃縮和活性炭處理等過程，可顯著降低了甘露聚糖肽中內毒素的含量。《長江大學學報（自科版）》，2017，14：2報道了發酵溫度和pH對甘露聚糖肽合成的影響，發現兩段式組合調控發酵比恒定溫度和pH模式下產量可提升35.9%。CN 101186941 B公開了一種高純度甘露聚糖肽的制備方法，經過對提取的粗品甘露聚糖肽進行分離、水解以及超濾等可獲得純度高達90~98%的甘露聚糖肽產品。申請號03117579.1公開了一種甘露聚糖肽及其制備工藝和用途，通過調控發酵過程中的pH和提取過程中乙醇的濃度，可將甘露聚糖肽的重均分子量和比旋光度控制在一定范圍內。《食品工業科技》，2015，36（05）：185-188+197指出酵母膏添加量的調控不僅能夠縮短菌株生長的延滯期，還可以影響其對甘露聚糖肽的代謝合成。

本發明的重點在于先將細胞進行處理，隨后應用于發酵生產甘露聚糖肽，相比于未經處理的細胞，不同種類的處理試劑的使用在不影響細胞內活性物質甚至提升細胞內酶活性的條件下，進一步結合采用微波協同超聲波輔助處理的手段，不僅能夠加劇細胞內的分子運動，還能增強試劑對細胞的處理程度，更加有效的實現生物催化的效率以及甘露聚糖肽的提取效率的顯著提升，最終將甘露聚糖肽的產量提升至少85%以上，進而在后續的分離純化過程中減少損失量。

發明內容

本發明提供一種細胞處理的方法及其在甘露聚糖肽合成中的應用。為實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

在搖瓶種子培養基中先對甲型溶血性鏈球菌進行高密度培養，提高菌株的轉化活力，所述的甲型溶血性鏈球菌為甲型溶血性鏈球菌H1S-33和/或甲型溶血性鏈球菌CMCC32205，隨后將菌株轉接入發酵培養基進行細胞處理。

進一步，處理所用的試劑為洋地黃皂苷、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯烷基苯酚醚、新吉爾滅、β-環糊精、桃膠中的一種或多種；并采用微波協同超聲波輔助處理細胞。

進一步，試劑對于細胞的處理時間為0.5~50 h，濃度為57 mg/L~398 mg/L；采用微波協同超聲波輔助處理細胞的時間為0~300 秒，中間間隔0~10次，每次間隔時間0~30秒，功率為200~800 W。

進一步，細胞處理時添加試劑的時間為發酵開始后的第0~40個小時。

進一步，細胞經上述處理后，甘露聚糖肽的產量能提升至少85%以上。

進一步，經此處理的細胞能夠應用于發酵制備甘露聚糖肽。