[發明專利]一種高純度酶改制甜菊糖苷及其制備方法

在審

• 申請號: 202010783270.X
• 申請日: 2020-08-06
• 公開（公告）號: CN111850071A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 周愛琴;周愛兵;于茂蘭;張璐璐
• 申請（專利權）人: 江蘇史蒂文生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56;C07H15/256;C07H1/00;C07H1/06
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 王佳妹

本發明屬于甜菊糖技術領域，提供了一種高純度酶改制甜菊糖苷的制備方法，包括：將甜菊糖苷與糊精溶解在水中；添加反應酶，攪拌均勻；在60?70℃條件下反應24?48h；添加糊精繼續反應5h，添加量為糊精量的10％?20％；升溫至90?105℃將酶滅活；冷卻后，活性炭過濾，除去顏色和雜質；將溶液配制成合適濃度，過大孔吸附樹脂，至溶液吸附完全，再用2倍吸附柱體積的水沖洗吸附柱；用4倍吸附柱體積的40％?50％的乙醇溶液洗脫，將大孔吸附樹脂樹脂間的未反應的甜菊糖苷和酶改制甜菊糖苷混合物洗脫下來；流出液紫外吸光度大于0.1?0.3時進行收集1?1.5BV的流出液；將流出液濃縮后噴干，獲得酶改制甜菊糖苷。

技術領域

本發明涉及甜菊糖技術領域，具體涉及一種高純度酶改制甜菊糖苷及其制備方法。

背景技術

甜菊糖苷(也稱甜菊糖)是一種從天然菊科草本植物甜葉菊的葉片中提取出來的多組分甜糖甙的混合物，是甜葉菊中的主要呈味物質，生產中用作食品甜味劑。甜菊糖苷主要包括甜菊甙、萊鮑迪甙A、萊鮑迪甙B、萊鮑迪甙C、萊鮑迪甙D、萊鮑迪甙E、杜克甙、甜菊雙糖甙等八種糖甙。甜菊糖具有純天然(來自純天然植物甜葉菊)、高甜度(蔗糖的250～450倍)、低熱量(僅為白糖的1/300)、使用經濟(成本僅為蔗糖的三分之一)、穩定性好(耐熱、耐酸、耐堿，不易出現分解現象)、安全性高(無毒副作用)等優點。

然而，天然甜菊糖的結構苷，無甜味且具有苦澀味，其中甜菊苷是甜菊糖苷中含量最高的成分之一，后苦味明顯，破壞了甜菊糖的口感，也限制了其更為廣泛的工業應用。通常是對甜菊糖苷進行酶改制，即利用環糊精葡萄糖轉移酶在甜菊糖苷分子上隨機加一分子或多分子葡萄糖。

目前現有的酶改制技術，操作復雜，最后獲得的酶改制甜菊糖苷純度不一，且含量較低，限制了酶改制甜菊糖苷的應用。

發明內容

本申請的目的在于克服上述問題或者至少部分地解決或緩減解決上述問題。

第一方面，本發明提供的高純度酶改制甜菊糖苷的制備方法，包括如下步驟：

步驟S1：將甜菊糖苷與糊精溶解在水中；

步驟S2：在步驟S1的溶液中添加反應酶，攪拌均勻；

步驟S3：將步驟S2的溶液在60-70℃條件下反應24-48h；

步驟S4：待步驟S3的反應完成后，添加糊精繼續反應5h，添加量為步驟S1中的糊精量的10％-20％；

步驟S5：將步驟S4中的反應物升溫至90-105℃，將酶滅活；

步驟S6：冷卻后，將步驟S5的反應溶液用活性炭過濾，除去顏色和雜質；

步驟S7：將步驟S6中獲得的溶液配制成質量濃度為1％-5％的溶液，過大孔吸附樹脂，直至溶液吸附完全，流速為1BV/h，再用2倍吸附柱體積的水沖洗吸附柱，洗掉殘留的糊精；

步驟S8：用4倍吸附柱體積的40％-50％的乙醇溶液洗脫，將大孔吸附樹脂樹脂間的未反應的甜菊糖苷和酶改制甜菊糖苷混合物洗脫下來，流速為0.5BV/h；流出液紫外吸光度大于0.1-0.3時收集1-1.5BV體積的流出液；

步驟S9：將流出液濃縮后噴干，獲得酶改制甜菊糖苷。

本申請通過對流出液用紫外線分析儀檢測吸光度，吸光度大于0.1-0.3時說明已經有酶改制甜菊糖苷和甜菊糖苷流出。

可選地，所述步驟S1中，甜菊糖苷與糊精的質量比為1：0.5-3，且甜菊糖苷的質量濃度為1％-20％。

可選地，所述步驟S2中，所述反應酶添加量為甜菊糖苷質量的1％-5％。

可選地，所述步驟S3中，在反應期間勻速攪拌反應溶液，轉速為50-100rpm/min。