[發(fā)明專利]一種表達傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白重組病毒載體的構建與應用

在審

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• 申請日: 2020-08-06
• 公開（公告）號: CN111909965A
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發(fā)明（設計）人: 蔣桃珍;張勇;宋亞芬;楊宵玥;陳玲;陳光華;楊承槐
• 申請（專利權）人: 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
• 主分類號: C12N15/869
• 分類號: C12N15/869;C12N15/40;A61K39/12;A61K39/245;A61P31/14;A61P31/22
• 代理公司: 北京象合知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11893
• 代理人: 封明艷

本發(fā)明構建了表達雞傳染性法氏囊病病毒VP2基因的重組火雞皰疹病毒，將該重組病毒株制備成活疫苗，可預防馬立克氏病和傳染性法氏囊病；通過同源重組的方法，應用該載體表達外源基因，為火雞皰疹病毒作為載體構建抗馬立克氏病和其他病原的新型重組疫苗打下基礎。

技術領域

本發(fā)明涉及針對禽類傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白的疫苗及方法。

背景技術

在不限制本發(fā)明范圍的情況下，結合雞傳染性法氏囊病(Infectious bursaldisease，IBD)病毒的發(fā)病率和死亡率描述其背景。雞傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)引起的一種急性、高度接觸性、傳染性疾病。該病可通過損傷法氏囊造成機體免疫抑制進而引起雛雞高死亡率。已知的IBDV有兩個血清型，即血清I型和II型，其中血清II型不致病或有很弱的致病性，血清I型則可引起雞群發(fā)病。從發(fā)現(xiàn)該病起的數(shù)十年中，血清I型IBDV產(chǎn)生了變異，經(jīng)典株、變異株和超強株相繼出現(xiàn)。20世紀90年代以來，高致死率的超強毒株(very virulent IBDV，vvIBDV)全球流行，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大損失。由于疫苗的開發(fā)、使用以及養(yǎng)殖管理技術的發(fā)展，vvIBDV 的流行逐漸被控制。但近年來IBD出現(xiàn)了新變化，非典型IBD在我國部分雞場相繼被發(fā)現(xiàn)，感染雞無明顯外觀癥狀，但其中樞免疫器官法氏囊卻嚴重萎縮，導致其嚴重免疫抑制和生產(chǎn)性能下降，嚴重威脅養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展。

疫苗接種是預防和控制IBD最主要的措施，目前商品化的傳染性法氏囊病活毒疫苗分為弱毒、中等毒和強毒三類。弱毒疫苗對雞安全，但對有母源抗體的雞群免疫保護效果不理想。中等毒力和強毒疫苗的免疫保護力雖然要好一些，但是由于具有一定的致病力會損傷法氏囊，也存在毒力返強的風險。另外，由于母源抗體的干擾以及IBDV的特點，在實際應用中傳統(tǒng)疫苗可形成不可避免的免疫空白期。VP2蛋白是IBDV的主要保護性抗原且其中和抗體可以引發(fā)機體對法氏囊強毒攻擊的保護，因此，構建表達IBDV VP2基因的疫苗具有較好的應用價值。

火雞皰疹病毒(Turkey Herpesvirus，HVT)屬于雞馬立克氏病病毒血清III 型的一種α皰疹病毒。在火雞中普遍存在，對家禽無致病性的病毒。從上個世紀70年代，HVT Fc-126株就作為疫苗用于馬立克氏病的預防和控制。由于其對家禽無致病性的特性，HVT作為活病毒載體構建新一代安全有效的疫苗已成為研究的重點方向之一。HVT有20多個可供外源基因插入的復制非必需區(qū)且可插入較長的外源基因。

發(fā)明內容

一方面，本發(fā)明提供一種禽傳染性法氏囊病病毒VP2基因的重組載體或VP2基因免疫原性衍生物重組載體，該VP2基因來自傳染性法氏囊病病毒的保護性抗原表位基因。

進一步，該VP2基因序列由SEQ ID No：1編碼，免疫原性衍生物是指與VP2序列相差1至100個核苷酸的基因序列、優(yōu)指相差1至50個核苷酸的基因序列或指包含VP2基因的核苷酸序列。

在一個具體實施方案中，禽傳染性法氏囊病病毒VP2基因的重組載體或其免疫原性衍生基因重組載體由病毒載體編碼。進一步，所述病毒載體是火雞皰疹病毒。

在另一個具體實施方案中，禽傳染性法氏囊病病毒VP2基因的重組載體或其免疫原性衍生基因重組載體是重組病毒(rHVT-U3VP2)，是由火雞皰疹病毒的非致病性骨架與禽傳染性法氏囊病病毒VP2基因或其免疫原性衍生基因結合的重組病毒(rHVT-U3VP2)。

另一方面，本發(fā)明提供一種包含禽傳染性法氏囊病病毒VP2基因重組載體或 VP2基因免疫原性衍生基因重組載體的疫苗組合物。

在一個實施方案中，該疫苗組合物包含火雞皰疹病毒的非致病性骨架與禽傳染性法氏囊病病毒VP2基因或其免疫原性衍生基因結合的重組病毒 (rHVT-U3VP2)。進一步，疫苗組合物包含編碼VP2蛋白或其免疫原性衍生蛋白的火雞皰疹病毒的重組病毒(rHVT-U3VP2)。