[發明專利]β-葡聚糖的制備工藝

有效

• 申請號: 202010777784.4
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN111778301B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 田軍;劉青;盧伊娜
• 申請（專利權）人: 上海珈凱生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/08
• 分類號: C12P19/08;C12N1/14;C08B37/02;C12R1/645
• 代理公司: 上海邦德專利代理事務所(普通合伙) 31312
• 代理人: 袁步蘭

1.一種β-葡聚糖的制備工藝，其特征在于：包括以下步驟：

1)菌種篩選：準備菌種，分別進行剛果紅瓊脂染色法定性測試，檢測菌種的β-1,3-葡聚糖酶活，進行篩選，得到待培養的裂褶菌菌種，備用；

2)菌種培養；取待培養菌種，斜面種子培養7-8d，培養溫度為26-28℃，再接種于平板培養基中，25-30℃下培養7-8d，得到種子液；

3)發酵：取種子液，置于發酵罐中發酵7-8d，得到發酵液；

4)粗提脫色：發酵液進行γ射線輻照，輻照后靜置，接著進行高壓均質，離心分離，上清液為β-葡聚糖高壓均質粗提液，沉淀部分加水后置于-15℃下凍結，25-28℃水浴下解凍，重復凍融操作2-3次，進行微波提取，離心分離，收集上清液，與β-葡聚糖高壓均質粗提液合并，脫鹽濃縮，再加入大孔樹脂，搖床中處理9-10h，處理溫度為20-28℃，得到脫色液；

5)脫蛋白：取脫色液，加入聚酰胺粉末，25-28℃下振蕩2-2.5h，抽濾，離心，取上清，加入乙醇醇析，析出物干燥，得到β-葡聚糖成品。

2.根據權利要求1所述的β-葡聚糖的制備工藝，其特征在于：包括以下步驟：

1)菌種篩選：準備菌種，分別進行剛果紅瓊脂染色法定性測試，檢測菌種的β-1,3-葡聚糖酶活，進行篩選，得到待培養的裂褶菌菌種，備用；

2)菌種培養；取待培養菌種，斜面種子培養7-8d，培養溫度為26-28℃，再接種于平板培養基中，25-30℃、170-180r/min條件下培養7-8d，得到種子液；

3)發酵：取種子液，置于發酵罐中發酵7-8d，攪拌轉速100-300r/min，得到發酵液；

4)粗提脫色：發酵液進行γ射線輻照，輻照后靜置10-15min，接著進行高壓均質，高壓均質壓力為65-70MPa，均質時間為25-30min，離心分離，上清液為β-葡聚糖高壓均質粗提液，沉淀部分加1-2倍量的水，置于-15℃下凍結3-4h，25-28℃水浴下解凍0.5-1h，重復凍融操作2-3次，進行微波提取，離心分離，收集上清液，與β-葡聚糖高壓均質粗提液合并，脫鹽濃縮，再加入大孔樹脂，搖床中處理9-10h，轉速為120-150r/min，處理溫度為20-28℃，得到脫色液；

5)脫蛋白：取脫色液，加入聚酰胺粉末，25-28℃下振蕩2-2.5h，振蕩頻率為100-150r/min，抽濾，離心，取上清，加入乙醇醇析，析出物干燥，得到β-葡聚糖成品。

3.根據權利要求2所述的β-葡聚糖的制備工藝，其特征在于：步驟4）中，單位體積的微波提取功率為3-4W/ml，提取時間為8-10min，料水比為1：20。

4.根據權利要求2所述的β-葡聚糖的制備工藝，其特征在于：步驟4）中，輻照源為60Co，源強度為200-210kCi，輻照劑量為700-800KGy。

5.根據權利要求2所述的β-葡聚糖的制備工藝，其特征在于：步驟3）中，發酵3-4d后發酵罐中依次加入淀粉脫支酶和糖化酶，溫度為28-32℃的條件下進行酶解。

6.根據權利要求2所述的β-葡聚糖的制備工藝，其特征在于：步驟3）中，發酵罐各組分原料包括：普通玉米粉15-25g/L、改性玉米粉3-6g/L、葡萄糖15-20g/L、檸檬酸2-3g/L、維生素0.1-0.3g/L、滑石粉1-1.5g/L、透明質酸0.1-0.3g/L、瓊脂15-20g/L、硫酸鎂1-2g/L、牛肉膏4-5g/L。

7.根據權利要求6所述的β-葡聚糖的制備工藝，其特征在于：所述改性玉米粉的制備步驟為：取非晶化玉米淀粉、水混合攪拌，制得淀粉乳，再將淀粉乳緩慢滴加至環己烷、三氯甲烷混合液中，接著加入乳化劑、交聯劑和引發劑，在50-55℃下反應1-3h，得到改性玉米粉；

所述乳化劑為司盤-60，所述引發劑為過硫酸銨和亞硫酸氫鈉混合物，所述交聯劑為N，N-亞甲基雙丙烯酰胺。