[發明專利]一種香豆素類熒光探針及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202010765621.4
• 申請日: 2020-08-03
• 公開（公告）號: CN111848661B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 湯艷峰;王純;孫同明;王敏敏;王金;王淼;崔會會;沈璐婕;陳遷浴
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C07F5/02
• 分類號: C07F5/02;C09K11/06;G01N21/64
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本發明屬于熒光分子探針領域，公開了一種香豆素類熒光探針及其制備方法與應用。本發明的制備方法包括以7?羥基香豆素為原料合成中間體7?羥基?8?香豆素醛，再以中間體7?羥基?8?香豆素醛為原料合成第二中間產物8?(苯并[d]噻唑?2?基)?7?羥基?2H?苯并吡喃?2?酮，再與2,4?二硝基苯磺酰氯通過取代反應合成香豆素類熒光探針。本發明熒光探針對ONOO^?有專一的選擇性，可應用于過氧亞硝酸鹽的體外熒光檢測。

技術領域

本發明屬于熒光分子探針領域，涉及一種香豆素類熒光探針及其制備方法與應用，特別是涉及一種檢測過氧亞硝酸鹽(ONOO-)的香豆素類熒光探針的制備方法及應用。

背景技術

過氧亞硝酸鹽(ONOO^-)是生命系統中最重要的內源性活性氧(ROS)之一，在各種生理和病理過程(例如信號轉導和抗菌活性)中起著至關重要的作用。但是，由于其強大的氧化和硝化能力，高水平的ONOO^-可能會損壞許多生物分子，包括脂質，DNA，蛋白質和酶，這可能進一步影響細胞過程，甚至引起細胞壞死和凋亡，最終導致各種疾病的出現，例如心血管疾病和損傷，自身免疫和炎性疾病，阿爾茨海默氏病，甚至癌癥。即使這些是已知事實，由于其在體內的低濃度，高反應性和短壽命，其在生命系統中的許多方面仍不清楚。因此，開發快速，選擇性，靈敏的生物體內ONOO^-檢測方法，對進一步了解生物ONOO^-具有十分重要意義。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種香豆素類熒光探針及其制備方法與應用，該熒光探針合成簡單，結構新穎，應用于體外檢測ONOO^-，具有較好的選擇性、靈敏性、抗干擾能力強等優點。

本發明提供了一種香豆素類熒光探針，其化學結構式如式(Ⅰ)所示：

本發明還提供了一種上述香豆素類熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

S1.將7-羥基香豆素與六次甲基四胺，溶于乙酸溶劑，70～100℃溫度條件下反應，反應結束后降溫至70℃以下，加入鹽酸調節體系pH值至2-5，乙酸乙酯萃取，乙醇重結晶得到如式(Ⅰ^’)所示結構的第一中間產物；

S2.將所述第一中間產物、2-氨基苯硫酚和偏亞硫酸鈉溶解于N，N-二甲基甲酰胺溶劑，110～120℃溫度條件下反應，反應結束后加水析出固體，過濾得到如式(Ⅱ)所示結構的第二中間產物；

S3.將所述第二中間產物、4-溴甲基苯硼酸頻哪醇酯和碳酸鉀溶于乙腈溶劑，在70～90℃反應，反應完畢后減壓濃縮反應得到的產物，乙醇重結晶得到所述香豆素類熒光探針。

優選的，上述制備方法的步驟S1中，7-羥基香豆素與六次甲基四胺的摩爾比為1：(0.55～0.7)。

優選的，上述制備方法的步驟S1中，所述反應的時間為6～8h。

優選的，上述制備方法的步驟S2中，所述第一中間產物、2-氨基苯硫酚和偏亞硫酸鈉的摩爾比為1：(1～1.2)：(0.86～1)。

優選的，上述制備方法的步驟S2中，所述反應的反應時間為1～3h。

優選的，上述制備方法的步驟S3中，第二中間產物、4-溴甲基苯硼酸頻哪醇酯以及碳酸鉀的摩爾比為1:(1～1.5)：(2.5～3.5)。

優選的，上述制備方法的步驟S3中，所述反應的反應時間為20～24h。

本發明還提供了一種上述香豆素類熒光探針或上述制備方法得到的香豆素類熒光探針在過氧亞硝酸鹽的體外熒光檢測中的應用。

與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：