[發明專利]一種人血漿中同型半胱氨酸的檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202010744203.7
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN111983057A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 錢學慶;秦煒;吳小虎;賀笑非
• 申請（專利權）人: 上海潤達榕嘉生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/88
• 代理公司: 上海領洋專利代理事務所(普通合伙) 31292
• 代理人: 羅曉鵬

1.一種人血漿中同型半胱氨酸的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)取人血漿樣品100μL，分別加入10-100μL 10-50μmol/L高胱氨酸-d8溶液、10-30μL堿溶液和20-100μL二硫蘇糖醇DTT水溶液，混勻，室溫下孵育10-20min；

2)向步驟1)所述溶液中加入500-1000μL蛋白沉淀劑，混勻，離心；

3)取步驟2)離心后上清液進樣，采用高效液相色譜-三重四極桿質譜儀檢測，獲得所述同型半胱氨酸檢測結果，所述高效液相方法條件如下，

色譜柱Agilent poroshell 120 EC-C18，2.1×50mm，2.7μm；

色譜柱柱溫25-35℃；

進樣量1-5μL；

流速0.1-0.3mL/min；

流動相體積比0.1％甲酸水:0.1％甲酸甲醇為90～99:10～1。

2.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述堿溶液為1-5％氨水。

3.根據權利要求2所述檢測方法，其特征在于，所述氨水濃度為2.5％。

4.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述二硫蘇糖醇水溶液為0.1-0.5mol/L。

5.根據權利要求4所述檢測方法，其特征在于，所述二硫蘇糖醇水溶液為0.3mol/L。

6.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述蛋白沉淀劑為0.05-0.5％甲酸乙腈溶液。

7.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述液相條件為：

色譜柱Agilent poroshell 120 EC-C18，2.1×50mm，2.7μm；

色譜柱柱溫30℃；

進樣量為1μL；

流速為0.2mL/min；

流動相體積比為0.1％甲酸水:0.1％甲酸甲醇，98:2。

8.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述三重四極桿質譜儀的檢測方法采用正離子模式，并采用多反應監測MRM的掃描方式，所述多反應監測MRM的參數如下：

9.一種人血漿中同型半胱氨酸的檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測試劑盒包括：同型半胱氨酸校準品、同型半胱氨酸質控品、同型半胱氨酸同位素內標溶液、堿溶液、還原劑溶液、蛋白沉淀劑溶液、0.1％的甲酸水溶液、0.1％的甲酸甲醇溶液。

10.根據權利要求9所述檢測試劑盒，其特征在于，所述同型半胱氨酸校準品為同型半胱氨酸的5種濃度，依次為5、10、20、50、100μmol/L的磷酸緩沖鹽溶液；所述同型半胱氨酸質控品為同型半胱氨酸的2種濃度，依次為15、50μmol/L的牛血清白蛋白磷酸緩沖鹽溶液，所述的牛血清白蛋白磷酸緩沖鹽溶液的質量體積分數為1％。