[發(fā)明專利]一種轉(zhuǎn)基因棉花COT102品系的雙重熒光定量PCR檢測

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010736864.5
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111733280A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李想;錢昌元;左翠花;尹璐;潘志霖
• 申請（專利權(quán)）人: 上海海關(guān)動植物與食品檢驗檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)基因棉花COT102品系的雙重熒光定量PCR檢測。本發(fā)明的方法包括同時針對兩種目標基因進行擴增，所述的兩種目標基因包括COT102基因和ACP1基因，根據(jù)擴增情況來確定棉花COT102轉(zhuǎn)基因品系的存在情況或存在量，或測定轉(zhuǎn)基因品系的存在比例。本發(fā)明的方法一方面解決了現(xiàn)有技術(shù)中沒有針對棉花COT102品系的雙重PCR定量檢測方法的問題；另一方面針對該轉(zhuǎn)基因品系的特點，確立了效果優(yōu)異的檢測試劑、優(yōu)化了檢測方法，檢測效率非常高。本發(fā)明對構(gòu)建和完善中國轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品定量檢測技術(shù)體系具有重要的實用價值和示范作用，可作為閾值管理的技術(shù)儲備。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于PCR熒光檢測領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)基因棉花COT102品系的雙重熒光定量PCR檢測方法。

背景技術(shù)

轉(zhuǎn)基因作物自1996年開始商業(yè)化規(guī)模種植，截至2018年底，全球累積種植面積達25億hm²。至2018年底，全球共有26個國家和地區(qū)種植轉(zhuǎn)基因作物，面積達1.917億hm²，約是1996年的113倍；另有44個國家和地區(qū)進口轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品。其中，轉(zhuǎn)基因棉花種植面積為2490萬hm²，占全球棉花總種植面積的76％。隨著轉(zhuǎn)基因作物在全球范圍內(nèi)的大規(guī)模種植和消費，越來越多的轉(zhuǎn)基因作物用于食品或飼料的生產(chǎn)加工。由于公眾對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品潛在生物安全性和食用安全性的持續(xù)關(guān)注，為了保障消費者的知情權(quán)和選擇權(quán)，越來越多的國家和地區(qū)開始實施轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標識管理制度，并設(shè)定了標識閾值。目前，中國實行最嚴格的零閾值轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品強制標識制度。為了保障標識制度的順利實施，建立轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測方法至關(guān)重要。

棉花是一種重要的經(jīng)濟作物，在食品和工業(yè)領(lǐng)域有諸多用途。棉籽油工業(yè)的主產(chǎn)品成品棉籽油是一種優(yōu)質(zhì)的食用植物油，含有大量人體必需的脂肪酸，同時又具有很好的起酥性，被譽為不含反式脂肪酸的天然起酥油；其副產(chǎn)品脫酚棉籽蛋白和飼用棉籽粕是重要的飼用蛋白原料；副產(chǎn)品棉籽殼是中國食用菌行業(yè)最主要的培養(yǎng)基原料。

目前，中國轉(zhuǎn)基因植物種植面積位居世界第7位。中國一直重視轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品管理，目前僅有轉(zhuǎn)基因棉花和番木瓜在中國批準商業(yè)化種植。同時，為了維護中國進境轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的安全性，中國農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理辦公室會對進口轉(zhuǎn)基因作物進行嚴格的安全性評估，通過后頒發(fā)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全證書，而進口的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品只能用作加工原料。隨著中國棉籽(粕)進口量的逐年增加，口岸急需對各轉(zhuǎn)基因品系進行檢測監(jiān)管，以防止農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全證書上未標明品系非法進入中國。同時，因目前國家標準和行業(yè)標準中均沒有該品系的檢測方法，因此針對COT102品系建立檢測方法也為棉花及其來源產(chǎn)品轉(zhuǎn)基因成分檢測相關(guān)標準的完善提供技術(shù)支撐。

轉(zhuǎn)基因棉花COT102品系是瑞士先正達公司研發(fā)的具有抗蟲性狀的轉(zhuǎn)基因棉花品系，自2005年起陸續(xù)在美國、澳大利亞、新西蘭等11個國家被批準用作食用或飼用原料，分別于2005、2017和2018年在美國、哥斯達黎加和澳大利亞被批準種植。該品系于2015年獲得中國農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全證書，批準進口用作食用和飼用原料。目前針對該品系的檢測方法僅有農(nóng)業(yè)部2630號公告-9-2017。該標準規(guī)定了COT102品系的普通PCR和實時熒光PCR定性檢測方法。

為了滿足口岸檢得快、檢得準的要求，需開發(fā)針對轉(zhuǎn)基因棉花COT102品系的高效率檢測方法，尤其是能夠?qū)崿F(xiàn)定量和轉(zhuǎn)基因組分含量比例計算的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種轉(zhuǎn)基因棉花COT102品系的雙重熒光定量PCR檢測方法及其應(yīng)用。針對現(xiàn)有技術(shù)缺乏針對轉(zhuǎn)基因棉花COT102品系的高效率檢測方法，本發(fā)明建立了轉(zhuǎn)基因棉花COT102品系雙重定量檢測方法，實現(xiàn)該品系成分的定性、定量檢測，提高檢測效率，降低檢測成本，提升通關(guān)效率，為進境轉(zhuǎn)基因棉花及其制品的有效監(jiān)管和標識制度的順利實施提供有效的技術(shù)保障。