[發明專利]一種生產利普司他汀的培養基及其使用方法

在審

• 申請號: 202010731323.3
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN111979277A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 賈曉樂;王繪磚;袁昉;徐珍
• 申請（專利權）人: 河北圣雪大成制藥有限責任公司
• 主分類號: C12P17/02
• 分類號: C12P17/02;C12N1/20;C12R1/56
• 代理公司: 北京集智東方知識產權代理有限公司 11578
• 代理人: 吳倩

1.一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：所述培養基為包括固體篩選培養基、斜面固體培養基、種子液培養基和發酵培養基的聯合培養基。

2.根據權利要求1所述一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：所述固體篩選培養基和斜面固體培養基中均含有辛酰-輔酶和亮氨酸；所述發酵培養基包括發酵基礎培養基和發酵流加培養基。

3.根據權利要求2所述一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：所述固體篩選培養基和斜面固體培養基的成分均為：可溶性淀粉、酵母粉、干酪素、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂粉、辛酰-輔酶A和亮氨酸。

4.根據權利要求2所述一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：所述發酵基礎培養基的成分為：糊精、甘油、豆油、黃豆餅粉、酵母粉、抗氧化劑、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、硫酸亞鐵、碳酸鈣、乳化劑；發酵流加培養基的成分為：亞油酸、亮氨酸、抗氧化劑和乳化劑；所述種子液培養基的成分為：糊精、甘油、黃豆餅粉和酵母粉。

5.根據權利要求2或3所述一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：所述固體篩選培養基中辛酰-輔酶A和亮氨酸的質量比為6-8:1，所述斜面固體培養基中辛酰-輔酶A和亮氨酸的質量比為3-5:1。

6.根據權利要求4所述一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：所述抗氧化劑的組成為維生素C和維生素E，且維生素C：維生素E的質量比為3-8:1。

7.根據權利要求3所述一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：所述固體篩選培養基的含量為：可溶性淀粉10-15g/L，酵母粉0.8-1.5g/L，干酪素0.8-1.5g/L，磷酸二氫鉀0.2-0.5g/L，硫酸鎂0.4-1.0g/L，瓊脂粉15-25g/L，辛酰-輔酶A5-10g/L，亮氨酸1-3g/L；所述斜面固體培養基的含量為：可溶性淀粉12-15g/L，酵母粉1.0-1.5g/L，干酪素1.0-1.5g/L，磷酸二氫鉀0.2-0.5g/L，硫酸鎂0.4-1.0g/L，瓊脂粉15-25g/L，辛酰-輔酶A 8-10g/L，亮氨酸2-3g/L。

8.根據權利要求4所述一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：所述發酵基礎培養基的含量為：糊精5-15g/L，甘油5-15g/L，豆油80-130g/L，黃豆餅粉20-35g/L，酵母粉10-25g/L，抗氧化劑0.5-1.5g/L，磷酸二氫鉀0.2-0.5g/L，硫酸鎂0.3-0.5g/L，硫酸亞鐵0.1-0.3g/L，碳酸鈣0.5-1.0g/L，乳化劑10-20g/L；發酵流加培養基的含量為：亞油酸5-10g/L，亮氨酸5-10g/L，抗氧化劑3-5g/L，乳化劑3-5g/L；所述種子液培養基的含量為：糊精15-25g/L，甘油15-25g/L，黃豆餅粉20-25g/L，酵母粉5-10g/L。

9.根據權利要求7或8所述一種生產利普司他汀的培養基，其特征在于：固體篩選培養基的含量為：可溶性淀粉13g/L，酵母粉1.0g/L，干酪素1.0g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，硫酸鎂0.6g/L，瓊脂粉22g/L，辛酰-輔酶A 8g/L，亮氨酸1.2g/L；所述斜面固體培養基的含量為：可溶性淀粉13g/L，酵母粉1.2g/L，干酪素1.3g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，硫酸鎂0.6g/L，瓊脂粉22g/L，辛酰-輔酶A 9g/L，亮氨酸2.5g/L；所述種子液培養基的含量為：糊精20g/L，甘油21g/L，黃豆餅粉24g/L，酵母粉8g/L；所述發酵培養基中的發酵基礎培養基的含量為：糊精12g/L，甘油12g/L，豆油90g/L，黃豆餅粉25g/L，酵母粉20g/L，抗氧化劑1.2g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，硫酸鎂0.4g/L，硫酸亞鐵0.2g/L，碳酸鈣0.8g/L，乳化劑18g/L；所述發酵培養基中的發酵流加培養基的含量為：亞油酸8g/L，亮氨酸6g/L，抗氧化劑3g/L，乳化劑5g/L。

10.一種生產利普司他汀的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

A、菌株篩選：將利普司他汀生產菌株涂布于固體篩選培養基，置于28±1℃，空氣相對濕度50％±10％條件下培養5天，得到生長成熟的單菌落；

B、單菌落斜面：挑選單菌落接種于斜面固體培養基上，置于28±1℃，空氣相對濕度50±10％條件下培養6天，得到生長成熟的菌苔；

C、種子液培養：將生長成熟的菌苔接種到種子液培養基中，28±1℃，培養20-25h，得到生長成熟的種子液；

D、發酵培養：將生長成熟的種子液按照5-8％的接種量接種到發酵基礎培養基中，28±1℃，培養5-6d，并在培養過程24-36h后開始流加所述發酵流加培養基，流加速度依據培養基中的亮氨酸含量確定，保持所述亮氨酸含量為在0.1-0.2mg/L。