[發明專利]一種用于治療激素臉和痘痘肌的組合物及其制備方法

在審

• 申請號: 202010730908.3
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN113975297A
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發明（設計）人: 杜煥青;沈繼廣;劉云龍;楊艷浩;杜婷
• 申請（專利權）人: 奧瑞京生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K31/728;A61K9/00;A61K47/26;A61K47/10;A61P17/00;A61P17/10;C12N5/0775
• 代理公司: 天津市尚文知識產權代理有限公司 12222
• 代理人: 郭平平

1.一種用于治療激素臉和痘痘肌的組合物，其特征在于所述組合物中包括以下活性成分：玻尿酸、甘油、維生素B、海藻糖、干細胞培養上清液，所述干細胞培養上清液來源于人源臍帶間充質干細胞。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于所述組合物中玻尿酸、甘油、維生素B、海藻糖、干細胞培養上清液的質量比為1-3：2-6：0.1-2：2-20：20-30。

3.根據專利要求2所述的組合物，其特征在于所述組合物中玻尿酸、甘油、維生素B、海藻糖、干細胞培養上清液的質量百分比為：1-3％：2-6％：0.1-2％：2-20％，20-30％，其余為滅菌注射用水。

4.根據專利要求1所述的組合物，其特征在于所述干細胞培養上清液為人源臍帶間充質干細胞培養2-6代時收集的上清液。

5.根據專利要求1所述的組合物，其特征在于所述干細胞培養上清液含有干細胞分泌的細胞因子，生長因子，趨化因子，抑炎因子中的至少一種。

6.一種用于治療激素臉和痘痘肌的組合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：(1)將玻尿酸、甘油、維生素B、海藻糖、干細胞培養上清液分別按照質量百分含量為：1-3％、2-6％、0.1-2％、2-20％、20-30％計算稱量，其余用滅菌注射用水補足100％；(2)將上述組分充分混合，進行無菌灌裝入2ml無菌無熱源的管中。

7.根據專利要求6所述的制備方法，其特征在于所述干細胞培養上清液的制備過程為：

a：將臍帶用75％酒精消毒、生理鹽水沖洗后，剪成1-2cm的小段，用生理鹽水排血，棄去廢液；

b：將臍帶小段剪成1-2mm³的臍帶塊，均勻接種于細胞培養瓶中，加入含10％胎牛血清的gibco培養基，放于5％CO₂、37℃培養箱內進行培養；

c：至上述需要傳代的細胞的細胞融合度達到80％-90％時，進行傳代培養；

d：收集第2代至第6代的培養上清，用濾膜過濾后存放在4度環境下備用。

8.根據專利要求7所述的制備方法，其特征在于所述傳代培養過程為：在含有符合細胞融合度要求的細胞培養瓶中加入0.25％濃度的胰酶消化，直至有大片細胞脫離瓶壁，鏡下觀察細胞呈球狀并已基本懸浮時，加入與胰酶同體積的胎牛血清終止消化；加生理鹽水將得到的細胞懸浮液置于離心管中離心，吸棄上清液；向離心管內加入含10％胎牛血清的gibco培養基，充分混勻后計數，根據計數結果調整細胞濃度為1.5×10⁶/ml；在培養瓶加入上述細胞懸液，補足含10％胎牛血清的gibco培養基，保證每個培養瓶培養體系為體積相同的完全培養液；置于5％CO₂、飽和濕度、37℃培養箱培養至細胞長滿瓶底后再次傳代；每2-3天傳代一次，傳至2-6代時收集細胞培養上清。

9.根據專利要求7所述的制備方法，其特征在于所述gibco培養基為DMEM/F12培養基；所述第2-6代的細胞培養上清，要求符合間充質干細胞的國際標準CD73、CD90、CD105呈陽性，陽性率不低于95％；CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR呈陰性，陽性率不高于2％。

10.一種用于治療激素臉和痘痘肌的組合物的使用方法，其特征在于使用滾針或微針將組合物導入皮膚，滾針或微針導入深度為0.5-1.0微米。