[發明專利]一種利用原子力顯微術對生物素化抗體-IgE免疫復合物直接成像的方法

有效

• 申請號: 202010719926.1
• 申請日: 2020-07-24
• 公開（公告）號: CN111830289B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 王作斌;胡婧;陳玉娟;高明燕;姜曉琳;董莉彤;宋正勛;許紅梅;翁占坤
• 申請（專利權）人: 長春理工大學
• 主分類號: G01Q60/24
• 分類號: G01Q60/24;G01N33/536
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及抗原?抗體免疫復合物直接成像技術領域，特別是涉及一種利用原子力顯微術對生物素化抗體?IgE免疫復合物直接成像的方法。本發明創造性地發現可以利用原子力顯微術對生物素化抗體?IgE免疫復合物的形貌進行分析，而且能夠通過形貌對單個免疫復合物中的生物素化抗體與IgE進行區分。與傳統方法相比，本發明涉及的方法簡單，樣品用量少，且能夠在納米尺度上直觀對生物素化抗體與IgE的結合情況進行判斷。因此，形態學分析有助于從分子水平研究抗原?抗體的相互作用，為疫苗和靶向治療的研究及應用提供新的途徑。此外，生物素化抗體?IgE免疫復合物的成功成像也使其他免疫復合物的直接成像成為可能。

技術領域

本發明涉及抗原-抗體免疫復合物直接成像技術領域，特別是涉及一種利用原子力顯微術(AFM)對生物素化抗體-IgE免疫復合物直接成像的方法。

背景技術

抗原-抗體結合研究在醫學診斷、疫苗開發、疾病機理分析、靶向治療等方面具有重要的意義。近年來，檢測抗原-抗體結合的主要方法是免疫分析法，但該方法在檢測過程中會使用許多生化試劑。生化試劑的廣泛使用不僅需要繁瑣的工藝，而且會造成嚴重的環境污染。

AFM是一種空間分辨率特別高、侵襲性極低的多功能生物分子研究的技術，近年來受到越來越多的關注。然而，利用AFM對生物素化抗體-IgE免疫復合物的成像的方法尚無報道。實際上，傳統的免疫學技術的靈敏度不夠高，遠遠達不到AFM的靈敏度。就檢測IgE濃度而言，ELISA法最低可檢測IgE濃度為0.24ng ML^-1。而本發明中通過AFM可以實現對IgE的單分子檢測。此外，傳統的免疫學方法需要的樣品量也比AFM多得多，嬰幼兒血液和腦脊液等不易得到樣品更是限制了免疫學方法的實際應用。更重要的是，免疫學技術致命的缺點是不能提供抗原-抗體結合的視覺圖像。而本發明可以通過AFM直接看到抗原-抗體結合的圖像。

發明內容

為解決現有技術中的問題，本發明的目的在于提供一種利用原子力顯微術對生物素化抗體-IgE免疫復合物直接成像的方法，本發明提供的方法步驟簡單，樣品用量少，靈敏度高且能夠對生物素化抗體和IgE進行直觀辨別。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：本發明使用的生物素化抗體是連接著生物素的IgG抗體，可以與IgE發生特異性結合。本發明發現，生物素化抗體比IgE多了一個“小尾巴”，因此可以直接根據形貌判斷二者是否結合。

1.一種利用AFM對生物素化抗體-IgE免疫復合物直接成像的方法，步驟如下：

A)向新鮮裂解的云母表面滴加MgCl₂·6H₂O溶液并孵育；

B)向MgCl₂·6H₂O溶液孵育后的云母表面滴加IgE溶液繼續孵育；

C)將覆蓋著IgE溶液的云母表面暴露在生物素化抗體溶液中；

D)利用原子力顯微術對已暴露在生物素化抗體溶液中的云母表面進行形貌測試。

優選的，所述步驟A中孵育時間為0.5min～2min。

優選的，所述步驟B中孵育時間為1min～10min。

優選的，所述步驟C中暴露時間為50min～70min。

優選的，所述步驟D中進行形貌測試的具體步驟為：

A1)將已暴露在生物素化抗體溶液中的云母表面洗凈吹干；

A2)利用原子力顯微術在輕敲模式下對吹干洗凈的云母表面進行形貌分析。

附圖說明

圖1為本發明實制得的生物素化抗體-IgE免疫復合物的AFM圖。

圖2為本發明實制得的生物素化抗體的AFM圖。