[發(fā)明專利]一種高頻菜心離體組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010710176.1
• 申請日: 2020-07-22
• 公開（公告）號: CN111727885B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋世威;梁雯雯;蘇蔚;郝彥偉;陳日遠;劉厚誠;孫光聞
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 佛山市君創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44675
• 代理人: 許菲菲

1.一種高頻菜心離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于包含如下步驟：

（1）將菜心種子經(jīng)表面消毒后置于播種培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；

（2）選取步驟（1）培養(yǎng)苗齡為3 d的無菌苗，在生長點上方平穩(wěn)切下帶柄子葉作為外植體，垂直插入分化培養(yǎng)基中進行分化培養(yǎng)，獲得不定芽；

（3）將步驟（2）獲得的不定芽轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，獲得組培苗；

（4）將步驟（3）獲得的組培苗開瓶煉苗，后續(xù)常規(guī)管理；

步驟（1）中所述的播種培養(yǎng)基為1/2 MS培養(yǎng)基+10 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂，pH=5.9；

步驟（2）中所述的分化培養(yǎng)基包含如下按終濃度計的組分：

MS+0.3 mg/L NAA+5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+12 g/L瓊脂+2 mg/L AgNO₃，pH=5.8；

步驟（3）中所述的生根培養(yǎng)基包含如下按終濃度計的組分：

MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+12 g/L瓊脂+5mg/L AgNO₃，pH=5.8；

步驟（2）中所述的帶柄子葉的子葉柄的長度為0.5cm；

步驟（1）中所述的菜心的品種為“油綠501”、增城一號、60天甜菜心或碧清甜菜心。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高頻菜心離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于：

步驟（1）中所述的表面消毒的具體操作為：

選取籽粒飽滿的菜心種子放入離心管中，依次用無菌水沖洗2遍、體積分數(shù)為75%的乙醇溶液浸泡2 min、無菌水沖洗2遍、質(zhì)量分數(shù)為7.5%的NaClO浸泡10 min，最后用無菌水沖洗三次并吸干水分。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高頻菜心離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于：

步驟（2）中所述的分化培養(yǎng)的時間為40d。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高頻菜心離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于：

步驟（3）中所述的不定芽的長度為1.0~2.0cm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高頻菜心離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于：

步驟（4）中所述的煉苗的方式為：選擇不定根生長健壯的組培苗，洗去根上所有培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至含有泥炭和蛭石的混合基質(zhì)中，保鮮袋套袋5~10天，后續(xù)常規(guī)管理。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高頻菜心離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于：

所述的泥炭和蛭石的質(zhì)量比為1:1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高頻菜心離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于：

步驟（1）、（2）（3）、（4）中組織培養(yǎng)的環(huán)境條件為25 ℃、16 h光照/8 h黑暗、光照使用110 μmol/m²s¹的白色LED燈。