[發(fā)明專利]磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010705132.X
• 申請(qǐng)日: 2020-07-21
• 公開（公告）號(hào): CN113024673B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王彥;賈孟琪;楊凱歌;閆超;王薇薇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K17/14
• 分類號(hào): C07K17/14;C12N5/09;B01J20/24;B01J20/10;B01J20/28;B01J20/30
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發(fā)明提供一種磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球。所述微球包括二氧化硅微球以及在微球表面修飾的磷脂酰絲氨酸多肽配體。采用本申請(qǐng)?zhí)峁┑男揎椇蠖趸栉⑶蚩梢赃x擇性地捕獲、分離外泌體，比起現(xiàn)在通常使用的差速離心法，操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，對(duì)外泌體的結(jié)構(gòu)無破壞性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種化學(xué)材料領(lǐng)域，特別是涉及一種磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球。

背景技術(shù)

人體是由多種不同的細(xì)胞、組織、器官和系統(tǒng)構(gòu)成的復(fù)雜有機(jī)體，這些組成單位能夠在體內(nèi)相互協(xié)調(diào)、共同維持整體生命活動(dòng)機(jī)能的正常運(yùn)行，主要是與它們的基本組成單位-細(xì)胞間的信息傳遞或細(xì)胞通訊密切相關(guān)，機(jī)體能釋放一些囊泡狀物質(zhì)到細(xì)胞外，以此來幫助完成細(xì)胞間的信號(hào)傳遞，這些囊泡統(tǒng)稱為細(xì)胞外囊泡，而外泌體是胞外囊泡的一種，直徑大小在 30-150nm，在免疫反應(yīng)、生理穩(wěn)態(tài)維持、血管生成、血栓形成及腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等方面具有重要作用。近來隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)外泌體還可作為一種腫瘤疾病診斷相關(guān)的新穎、獨(dú)特、潛在的生物標(biāo)志物。

針對(duì)外泌體開展各種生物學(xué)功能和生物標(biāo)志物研究的前提是外泌體的分離和收集，目前針對(duì)外泌體的分離、收集的方法主要是依據(jù)其尺寸和表面標(biāo)記物的差別而設(shè)計(jì)的，主要包括差速離心法、蔗糖密度梯度離心法、超濾離心法、聚合物沉淀法和親和富集法等。盡管以上的幾種方法和技術(shù)都可用于外泌體分離和純化，但在實(shí)際使用中均存在較多的缺點(diǎn)和限制，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足目前科研和臨床的需求。因而，迫切需要大量研究來開發(fā)便捷、高效的外泌體分離方法。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球，及其制備方法與應(yīng)用，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中外泌體分離提取困難的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球，所述微球包括二氧化硅微球以及在微球表面修飾的磷脂酰絲氨酸多肽配體。

所述二氧化硅微球的平均粒徑范圍為10-80μm。包括但不限于平均粒徑分別為10、20、 40、60、80μm的二氧化硅微球。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過市購(gòu)獲得。

PS多肽配體即為磷脂酰絲氨酸多肽配體(PS-Peptide)。

進(jìn)一步地，所述磷脂酰絲氨酸多肽配體選自SEQ ID NO.1-2任一所示多肽。

SEQ ID NO.1為CLIKKPF。SEQ ID NO.2為CPGDLSR。

進(jìn)一步地，所述多配體通過活性基團(tuán)或者化學(xué)鍵修飾在二氧化硅表面。例如可以利用雙鍵將磷脂酰絲氨酸多肽配體與二氧化硅微球連接。當(dāng)然也可以采用其他化學(xué)鍵或者基團(tuán)將兩者連接。

本發(fā)明的另一方面提供了一種用于分離外泌體的制劑，所述制劑中包含上述磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球。其中所述磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球作為核心分析試劑。

本發(fā)明的另一方面提供了一種用于分離外泌體的組合物，所述組合物中含有上述磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球和緩沖液。

進(jìn)一步地，所述緩沖液中含有Ca²⁺。當(dāng)然還可以包括其他用于分離的常用實(shí)驗(yàn)室制劑。

本發(fā)明的另一方面提供了上述磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球的制備方法，所述方法包括：

(1)在二氧化硅微球表面修飾活性基團(tuán)；

(2)將修飾后的二氧化硅與磷脂酰絲氨酸多肽配體混合反應(yīng)，所述磷脂酰絲氨酸多肽配體末端接枝有可與活性基團(tuán)反應(yīng)的反應(yīng)基團(tuán)，反應(yīng)后即可。

本發(fā)明的另一方面提供了上述磷脂酰絲氨酸多肽配體修飾的二氧化硅微球用于分離外泌體的用途。