[發明專利]一種牛白藤葉片愈傷組織誘導莖芽擴繁的方法

在審

• 申請號: 202010697782.4
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN111631139A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 莫昭展;林桂安;盧娟
• 申請（專利權）人: 玉林師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟;馬赟齋

本發明公開了一種牛白藤葉片愈傷組織誘導莖芽擴繁的方法，屬于植物組織培養領域。包括步驟：采集牛白藤單株上的葉片作為外植體；對外植體消毒后切割，并誘導培養形成愈傷組織；不定芽培養；生根培養；進行移植。本發明選擇牛白藤葉片為外植體，通過組織培養的方法實現了牛白藤種苗的工廠化生產，其愈傷組織誘導率可達88％，移植成活率達到了95％以上。本發明具有成本低廉、繁殖系數高、種苗生長相對一致等特點，對于促進牛白藤的種質資源利用具有重大意義。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體涉及一種牛白藤葉片愈傷組織誘導莖芽擴繁的方法。

背景技術

牛白藤(Hedyotis hedyotidea)為茜草科植物，分布于我國廣東、廣西、云南省份。牛白藤為粗壯藤狀灌木，高3-5m，密被粉末狀柔毛；葉對生；葉片卵形或卵狀披針形；腋生或頂生球形花序；蒴果近球形，花期秋季。

牛白藤別名有毛雞屎藤、膿見消、癍痧藤等，具有清熱解毒之功效。常用于風熱感冒，肺熱咳嗽，中暑高熱，腸炎，皮膚濕疹，帶狀皰疹，癰瘡腫毒；是一種常見瑤藥。

目前，牛白藤多依靠采摘野生植株為來源；野生種群已經滿足不了醫藥和研究的需求，因此需要一種能夠實現大規模繁殖牛白藤的方法以保障其需求。

發明內容

本發明針對上述現有技術存在的問題，提供一種牛白藤葉片愈傷組織誘導莖芽擴繁的方法，建立牛白藤離體快速繁殖技術體系

為實現本發明目的，通過以下技術方案予以實現：

一種牛白藤葉片愈傷組織誘導莖芽擴繁的方法，包括以下步驟：

(1)外植體采集：采集牛白藤單株上的葉片作為外植體；

(2)愈傷組織培養：對外植體消毒后切割，并誘導培養形成愈傷組織；

(3)不定芽培養：對愈傷組織進行不定芽培養，得不定芽叢；

(4)壯苗培養：對不定芽叢進行生根培養，得試管苗；

(5)移植：將試管苗進行移植，得種苗。

優選地，所述步驟(1)中采集無病蟲害、且葉齡為10-15天的新葉葉片作為外植體。

優選地，所述步驟(2)中：先對外植體用水進行沖洗，然后使用酒精消毒，再使用升汞溶液消毒并沖洗；然后將葉片切割并接種到愈傷組織培養基上培養25-30天形成愈傷組織。

優選地，所述愈傷組織培養基的條件為：

LS培養基，1.0-3.0mg/L核黃素、0.1-0.5mg/L活性碳、0.5-1.0mg/L CPPU、0.1-0.5mg/L NAA、25-30g/L蔗糖、3.0-4.0g/L瓊脂，pH為5.4-5.6。

優選地，所述步驟(3)中，將愈傷組織與培養基接觸的組織切除，然后將愈傷組織切成塊后接種到不定芽培養基培養25-30天；

所述不定芽培養基的條件為：

LS培養基，1.0-3.0mg/L核黃素、0.1-0.5mg/L活性碳、0.1-0.5mg/L ZT、0.05-0.1mg/L NAA、25-30g/L蔗糖、3.0-4.0g/L瓊脂，pH為5.4-5.6。

優選地，所述步驟(4)中，將不定芽叢分成單個的不定芽，然后接種到生根培養基中培養25-35天；

所述生根培養基的條件為：

1/2MS培養基，0.1-0.5mg/L SA、0.5-1.0mg/L NAA、25-35g/L蔗糖、3.0-4.0g/L瓊脂，pH為5.4-5.6。