[發明專利]黑色素前體物多巴醌的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202010695664.X
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN111826406A
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 張天;杜成強
• 申請（專利權）人: 西安幸福未來化妝品有限公司
• 主分類號: C12P13/04
• 分類號: C12P13/04;A61K8/44;A61Q5/10
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 李罡

本發明公開了一種黑色素前體物多巴醌的制備方法及應用，克服了傳統染發劑中染發成分對苯二胺具有毒性的缺點。本發明的技術方案為：以黧豆提取物左旋多巴為主要生色活性物質，使用土豆皮提取的酪氨酸酶在生物工藝催化反應下生成黑色素前體多巴醌。本發明所制得的黑色素前體物多巴醌，替代了傳統染發劑中染發成分對苯二胺，將其應用于染發劑中，使用植物提取物進行制備，制備過程對環境友好，安全環保，所制備得到的黑色素前體物多巴醌對人體沒有毒性。

技術領域

本發明屬于特殊化妝品領域，具體涉及一種黑色素前體物多巴醌的制備方法及應用。

背景技術

現代化學染發劑以對苯二胺的發現與使用為起始，雖然已經過了多年的優化與改進，但仍不能避免這類物質及其衍生物所帶來的的毒性和副作用。原因是其關鍵原料PPD(對苯二胺)及PTD(2，5-二氨基甲苯)是引起變態反應的主要變應原，而且滲透能力強，在染發的過程中會通過毛囊快速擴散到體內，從而帶來健康隱患和不適的感覺。我國規定PPD及PTD在染發劑中的最高允許濃度分別為6%和10%，而歐洲最高濃度為2%和4%。據統計，PPD的致敏率為0.1%～l%，過敏患者斑貼試驗的PPD致敏率為2%～5%。PPD引起美發從業人員接觸性皮炎則更常見，發生率為19%～35%。另外染發劑中還含有其他不安全的助劑：間苯二酚能刺激皮膚及粘膜，經皮膚迅速吸收，引起中毒癥狀；對氨基苯酚、鄰氨基苯酚、間氨基苯酚具有苯胺和苯酚的雙重毒性，經皮膚吸收引起高鐵血紅蛋質癥和哮喘；巰基乙酸具有較強烈的刺激性，與眼接觸可致嚴重損害，對皮膚有致敏作用，可引起皮炎。因此這類染發劑雖然高效，但并不安全，且染發的過程中會散發出讓人不適的氣味，嚴重影響染發的體驗。

植物染發劑利用天然染料與帶正電荷的表面活性劑組合成粒徑小的顆粒，附著在頭發表面，可以使用幾種植物染料混合呈現不同的顏色，或以植物染料與水溶性色素搭配出不同顏色，由于染料分子只以吸附的方式與毛鱗片作用，一般歸類于暫時型或半永久型染發劑，此類植物來源主要是一些色素含量較為豐富的植物，主要包括海娜、甘蘭菊、小粟堿、番紅花、姜黃素等。但以海娜粉為首的純植物染發劑其中也含PPD類物質，實質是在對苯二胺染發劑中添加部分植物提取物，其中有效的染色成分仍是對身體有毒有害的對苯二胺類物質。

發明內容

本發明的目的是要提供一種黑色素前體物多巴醌的制備方法及應用。

為了達到上述目的，本發明提供一種黑色素前體物多巴醌的制備方法，以黧豆提取物左旋多巴為主要生色活性物質，使用土豆皮提取的酪氨酸酶在生物工藝催化反應下生成黑色素前體多巴醌。

一種黑色素前體物多巴醌的制備方法，具體步驟如下：

步驟一、黧豆提取物的制備：

將藜豆粉碎，用30%乙醇與0.1%乙酸的混合液常溫提取，過濾，得提取液；將提取液減壓濃縮，析出結晶，靜置過夜，過濾，得左旋多巴粗品；粗品溶解過濾，濾液加少量維生素C， 調節pH為3.5，析出結晶，靜置4h，過濾；濾餅洗滌干燥，得黧豆提取物；

步驟二、酪氨酸粗酶凍干粉的制備：

馬鈴薯塊莖過夜，清水解凍，得碎皮屑，加入聚乙烯吡略烷酮和磷酸緩沖液勻漿，過濾，緩慢加入硫酸銨粉末，離心；取上清液繼續加入硫酸銨，離心；沉淀真空冷凍干燥，得到酪氨酸粗酶凍干粉；

步驟三、利用步驟一和二制得的提取物進行生物催化反應：

配置濃度為10%黧豆提取物溶液，加入生物反應器中，將溫度控制在35℃，按照黧豆提取物溶液體積的1/10的比例，加入質量分數30%酪氨酸粗酶凍干粉溶液，進行生物轉化反應，定時取樣檢測，當300nm的吸光度大于2.0并且475nm的吸光度大于0.5時，終止生物轉化反應，得到黑色素前體物粗品；

步驟四、對步驟三所得的黑色素前體物粗品進行離心去蛋白、活性炭吸附去黑色素顆粒、乙酸乙酯萃取、旋轉蒸發除溶劑純化處理，得到黑色素前體物多巴醌。