[發明專利]生物礦化型固定脂肪酶的制備方法及其在催化合成OPO中的應用在審
| 申請號： | 202010691701.X | 申請日： | 2020-07-17 |
| 公開（公告）號： | CN111647593A | 公開（公告）日： | 2020-09-11 |
| 發明（設計）人： | 謝恬;王安明;李寧寧;張靜 | 申請（專利權）人： | 杭州師范大學 |
| 主分類號： | C12N11/14 | 分類號： | C12N11/14;C12P7/64 |
| 代理公司： | 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240 | 代理人： | 鄭芳 |
| 地址： | 311121 浙江省杭*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 生物 礦化型 固定 脂肪酶 制備 方法 及其 催化 合成 opo 中的 應用 | ||
1.一種生物礦化型固定脂肪酶的制備方法，其特征在于：在磷酸鹽緩沖液中，加入脂肪酶和一定比例的氯化鈣溶液，隨后將混合物靜置于1～8℃，得到固定化脂肪酶。
2.根據權利要求1所述的生物礦化型固定脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述脂肪酶為疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶。
3.根據權利要求2所述生物礦化型固定脂肪酶的制備方法，其特征在于脂肪酶通過下述方法得到：首先，在pPIC9K載體上構建疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶基因，然后將重組質粒轉移至畢赤酵母菌株GS115中，誘導表達后獲得脂肪酶。
4.根據權利要求1或3所述生物礦化型固定脂肪酶的制備方法，其特征在于：磷酸鹽緩沖液的濃度為0.02mol·L-1，pH為7.0。
5.根據權利要求1所述生物礦化型固定脂肪酶的制備方法，其特征在于：加入的脂肪酶的終濃度為0.05～0.25mg·mL-1。
6.根據權利要求1所述生物礦化型固定脂肪酶的制備方法，其特征在于：加入的氯化鈣溶液的濃度為0.2mol·L-1，磷酸鹽緩沖液體積與氯化鈣溶液體積比為40～60：1。
7.根據權利要求4所述生物礦化型固定脂肪酶的制備方法，其特征在于具體包括下述步驟：在100mL磷酸鹽緩沖液中，加入終濃度為0.1mg·mL-1的脂肪酶和2mL氯化鈣溶液，隨后將混合溶液放置在4℃下放置24小時，10000rpm離心10min，得到固定化脂肪酶。
8.權利要求1所述生物礦化型固定脂肪酶在催化合成OPO中的應用。
9.根據權利要求8所述生物礦化型固定脂肪酶在催化合成OPO中的應用，其特征在于包括下述步驟：加入底物三棕櫚酸甘油酯、油酸、固定化脂肪酶、正己烷，在搖床中反應得到OPO。
10.根據權利要求9所述生物礦化型固定脂肪酶在催化合成OPO中的應用，其特征在于包括下述步驟：所述三棕櫚酸甘油酯、油酸的摩爾比為1：2～10，反應中含水量為2％；搖床反應條件為：溫度25～55℃，轉速220rpm。
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