[發明專利]一種從秋茄中克隆擴增出來的丙酮酸脫羧酶基因及其應用

有效

• 申請號: 202010675629.1
• 申請日: 2020-07-14
• 公開（公告）號: CN112063638B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 尚琛晶;鄧建文;周喬;王友紹;郝凌云
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12Q1/6895
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙) 44268
• 代理人: 徐凱凱

1.一種從秋茄中克隆擴增出來的丙酮酸脫羧酶基因，其特征在于，所述丙酮酸脫羧酶基因全長為2040bp，其核苷酸序列為SEQ NO.1，所述丙酮酸脫羧酶基因編碼的蛋白包括586個氨基酸，其氨基酸序列為SEQ NO.6；所述蛋白為胞質蛋白，其含有24個螺旋和17個折疊，存在1個跨膜螺旋區域，氨基酸位置為第A443-S451位；所述蛋白包含了Mg²⁺結合位點，蛋白激酶C磷酸化位點，酪氨酸激酶磷酸化位點1，酪蛋白激酶II磷酸化位點，多個N-豆蔻酰化位點，DHS樣NAD/FAD結合位點和硫胺素二磷酸結合折疊。

2.根據權利要求1所述的丙酮酸脫羧酶基因，其特征在于，用于克隆所述丙酮酸脫羧酶基因的引物序列包括第一輪PCR引物以及巢式PCR引物，所述第一輪PCR引物的核苷酸序列為SEQ NO.2和SEQ NO.3，所述巢式PCR引物的核苷酸序列為SEQ NO.4和SEQ NO.5。

3.一種檢測如權利要求1-2任一所述丙酮酸脫酸酶基因表達含量變化的方法，其特征在于，包括步驟：

將秋茄進行缺氧處理預定時間后，提取秋茄的總RNA；

利用反轉錄試劑盒將所述總RNA反轉錄成cDNA；

利用序列為SEQ NO.6-SEQ NO.610的引物對所述cDNA進行定量PCR檢測。

4.根據權利要求3所述檢測丙酮酸脫羧酶基因表達含量變化的方法，其特征在于，所述缺氧處理為水淹處理。

5.一種如權利要求1-2任一所述丙酮酸脫羧酶基因的應用，其特征在于，將所述丙酮酸脫羧酶基因用于植物品種改良。