[發(fā)明專利]液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)新型心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志物的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010024358.3
• 申請(qǐng)日: 2020-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN111505132A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周洲;王愷雋;武紅梅;趙麗平;高小晶;栗琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外醫(yī)院;北京豪思生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
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• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明屬于臨床生物樣本檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)生物樣本中氧化三甲胺、膽堿、甜菜堿、肌酐和左旋肉堿的方法；該方法可以同時(shí)檢測(cè)生物樣本中5種物質(zhì)，具有高準(zhǔn)確度、高靈敏度、高特異性以及所需樣本體積少、樣本前處理簡(jiǎn)單及耐受性好等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)生物樣本中的氧化三甲胺、膽堿、甜菜堿、左旋肉堿和肌酐的方法。

背景技術(shù)

中國(guó)心血管病(cardiovascular disease，CVD)的患病率及死亡率持續(xù)上升，患病人數(shù)約2.9億。CVD死亡率居各病因之首，占居民疾病死亡構(gòu)成的40％以上。與此同時(shí)，中國(guó)心血管疾病負(fù)擔(dān)日漸加重，已成為重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，國(guó)民生活方式發(fā)生了深刻的改變。在社會(huì)老齡化和城市化進(jìn)程加快、居民不健康生活方式盛行的背景下，國(guó)民CVD危險(xiǎn)因素普遍暴露，高血壓、血脂異常、糖尿病的患病率持續(xù)增加，導(dǎo)致了中國(guó)CVD患病率和死亡率的不斷上升，目前CVD 呈現(xiàn)在低齡化、低收入群體中快速增長(zhǎng)趨勢(shì)。今后十年我國(guó)CVD患病人數(shù)仍將持續(xù)增長(zhǎng)，防控工作十分嚴(yán)峻。

降低CVD風(fēng)險(xiǎn)的一個(gè)重要步驟是識(shí)別和治療已知的風(fēng)險(xiǎn)因素(如吸煙、血脂異常、高血壓、飲食不良)。新的風(fēng)險(xiǎn)因素，如代謝物氧化三甲胺(TMAO)，有助于完善CVD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并可能成為CVD治療干預(yù)的新目標(biāo)物質(zhì)。

循環(huán)系統(tǒng)中的TMAO與心血管疾病的各種病理生理過(guò)程有關(guān)。血液中的TMAO 水平與攝入的營(yíng)養(yǎng)成分：如膽堿(Choline)、甜菜堿(Betaine)和左旋肉堿 (L-Carnitine)。腸道細(xì)菌將這些前體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為三甲胺(TMA)，三甲胺隨后在肝臟中氧化為TMAO。研究表明在嚙齒類動(dòng)物模型中，富含TMAO前體的飲食增加動(dòng)脈粥樣硬化引起的泡沫細(xì)胞，導(dǎo)致主動(dòng)脈病變，抑制膽固醇從組織轉(zhuǎn)移到肝臟，并改變血小板特性增加血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。

大量前瞻性隊(duì)列的薈萃分析表明，高濃度的TMAO與主要不良冠狀動(dòng)脈事件(MACE)和死亡率的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，并獨(dú)立于其他風(fēng)險(xiǎn)因素。臨床數(shù)據(jù)支持在接冠狀動(dòng)脈造影和急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者中，使用TMAO進(jìn)行更準(zhǔn)確的MACE風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)。臨床數(shù)據(jù)也支持使用TMAO來(lái)完善外周動(dòng)脈疾病、心力衰竭、慢性腎病和心肌梗死患者的全因死亡率的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。臨床醫(yī)生和研究人員可根據(jù)TMAO的影響，定義為指導(dǎo)飲食調(diào)整和治療的工具。

肌酐(Creatinine)是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，其水平與腎功能相關(guān)，長(zhǎng)期高血壓或血性心功能不全會(huì)引起腎損傷，進(jìn)而使肌酐水平升高。

目前，長(zhǎng)沙都正生物科技有限責(zé)任公司于2017年6月27日申請(qǐng)的中國(guó)專利“一種氧化三甲胺定量檢測(cè)試劑盒及方法”，申請(qǐng)?zhí)?01710502265.5，該發(fā)明公開一種測(cè)定氧化三甲胺的液相串聯(lián)質(zhì)譜方法，但是僅可測(cè)氧化三甲胺一種物質(zhì)，且沒(méi)有闡明應(yīng)用價(jià)值。蘇州帕諾米克生物醫(yī)藥科技有限公司于2018年9月13日申請(qǐng)的中國(guó)專利“一種測(cè)定小分子生物標(biāo)志物的方法”，申請(qǐng)?zhí)?01811068542.7，該發(fā)明公開一種測(cè)定11種小分子(膽堿、甜菜堿、左旋肉堿、氧化三甲胺、肌酐、同型半胱氨酸、亮氨酸/異亮氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)的液相串聯(lián)質(zhì)譜方法：由于一次檢測(cè)多種物質(zhì)，樣本前處理復(fù)雜，且需要使用還原劑。常州市第一人民醫(yī)院于2019年4月8日申請(qǐng)的中國(guó)專利“一種試劑盒”，申請(qǐng)?zhí)?01910274765.7，該發(fā)明公開一種測(cè)定血漿TMAO含量的試劑盒，僅可測(cè)TMAO一種物質(zhì)。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)關(guān)于新型心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志物的方法檢測(cè)的過(guò)程主要缺陷在于：

1、多數(shù)方法僅僅能檢測(cè)TMAO一種物質(zhì)，無(wú)法滿足臨床需求；

2、生物樣本前處理方法太復(fù)雜，無(wú)法自動(dòng)化，難以推廣到臨床應(yīng)用；

3、檢測(cè)標(biāo)志物臨床意義不明確，且無(wú)足夠文獻(xiàn)及數(shù)據(jù)支撐。

4、檢測(cè)無(wú)關(guān)標(biāo)志物太多，成本太高。

發(fā)明內(nèi)容