[發明專利]一種液相色譜串聯質譜測定血漿中教酒菌素濃度的方法

有效

• 申請號: 202010640495.X
• 申請日: 2020-07-06
• 公開（公告）號: CN111751469B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 儲繼紅;戴國梁;許美娟;吳婷;李長印;歐陽冰琛;居文政;鄒建東
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 肖明芳

本發明公開了一種液相色譜串聯質譜測定血漿中教酒菌素濃度的方法，先用液相色譜將教酒菌素從血漿樣品中分離，再利用質譜內標定量法，以校正標樣中教酒菌素的濃度為X軸，校正標樣中教酒菌素與內標物的峰面積比值為Y軸，建立標準曲線，計算血漿中教酒菌素的濃度。本發明具有如下優勢：(1)專屬性強：教酒菌素及內標柚皮素保留時間均為0.6min左右，內源性物質不干擾二者的測定；(2)分析時間短：每個樣品檢測時間為1min；(3)靈敏度高：最低定量限為1ng·mL^?1；(4)本方法的血漿標準曲線線性范圍為1～1000ng·mL^?1，批內和批間精密度CV均小于10％。

技術領域

本發明屬于藥物分析技術領域，涉及體內藥物的分析測定方法，具體涉及一種液相色譜串聯質譜測定血漿中教酒菌素濃度的方法。

背景技術

教酒菌素(Chartreusin)最初是從教酒鏈霉菌(Streptomyces chartreusis)中分離得到的多環芳香聚酮類化合物。體內外實驗證明教酒菌素具有強效抗腫瘤作用，其可與DNA結合，通過自由基斷裂DNA，進而誘導腫瘤細胞凋亡，是一種具有良好開發前景的藥源化合物。其結構式如下：

目前尚無關于教酒菌素體內測定方法的文獻報道。本發明建立了一種具有高靈敏度和高選擇性的液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)方法，用于測定血漿中教酒菌素的濃度。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種準確高效測定血漿中教酒菌素濃度的方法，即一種LC-MS/MS測定血漿中教酒菌素濃度的方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：一種LC-MS/MS測定血漿中教酒菌素濃度的方法，即先用液相色譜將教酒菌素從血漿樣品中分離，再利用質譜內標定量法，以校正標樣中教酒菌素的濃度為X軸，校正標樣中教酒菌素峰面積As與內標物的峰面積Ai比值f為Y軸，建立標準曲線，以教酒菌素和內標柚皮素的峰面積比值代入標準曲線方程計算血漿中教酒菌素的濃度，具體的色質譜條件為：

(1)液相色譜條件：

色譜柱：Waters Xterra MS C18，2.1×50mm，3.5μm；

流動相：體積比為70:30的乙腈與2mmol·L^-1醋酸銨水溶液；

洗脫方式：等度洗脫；

流速：300μL·min^-1；

柱溫：40℃；

進樣量：5μL；

分析時間：1min；

自動進樣器溫度：4℃；

(2)質譜條件：

離子源為電噴霧離子化電離源ESI；離子檢測方式為多反應監測；離子極性為負離子；離子源電壓IS：-4000V；離子源溫度TEM：400℃；碰撞氣CAD：10psi；氣簾氣CUR：20psi；離子源Gas1：55psi；離子源Gas2：60psi；碰撞室入口電壓：-9V；碰撞室出口電壓：-10V；檢測對象的離子選擇通道：教酒菌素，[M-H]^-，m/z 639.2→332.0，DP-170V，CE-58eV；內標柚皮素，[M-H]^-，m/z 270.9→150.8，DP-86V，CE-25eV。

其中，所述的血漿樣品按照如下方法進行預處理：向血漿樣品(給予過教酒菌素的人血漿或者動物血漿)中加入柚皮素內標工作液10μL血漿樣品，再加入甲醇400μL血漿樣品，渦旋振蕩3min進行蛋白沉淀，4℃離心(12000rpm×10min)，取上清液150μL于具內襯管的進樣瓶中進行LC-MS/MS分析。