[發(fā)明專利]能夠特異性識別RBD蛋白的IgA抗體以及試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010639269.X
• 申請日: 2020-07-06
• 公開（公告）號: CN111690060A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程方明;林曉濤;黨智笙;吳力強;錢純亙;胡鹍輝
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/68
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 方宇

本發(fā)明涉及病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種能夠特異性識別RBD蛋白的IgA抗體以及試劑盒。該抗體可以作為SARS?CoV?2的RBD蛋白的IgA抗體的校準(zhǔn)品應(yīng)用。本發(fā)明還提供了包含該抗體的試劑盒，該試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)對新型冠狀病毒肺炎IgA抗體的自動化、高通量、快速檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種能夠特異性識別RBD蛋白的IgA抗體以及試劑盒。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2，亦被稱為2019-nCoV、HCoV-19)屬于β屬的冠狀病毒，顆粒呈圓形或橢圓形直徑60nm～140nm，基因特征與SARS具有明顯的區(qū)別，且相比于SARS，具有更高的感染能力。基于流行病學(xué)調(diào)查，COVID-19的潛伏期為1～14天，多為3～7天，癥狀以發(fā)熱、干咳、乏力為主，重癥患者躲在發(fā)病一周后出現(xiàn)呼吸困難和/或低氧血癥，嚴(yán)重者可快速進展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒和出現(xiàn)凝血功能障礙及多器官功能衰竭等。因此，如何快速確診疑似病例，以及如何有效監(jiān)控疾病進程，將為治療COVID-19，打好疫情攻堅戰(zhàn)的重點。

據(jù)《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第六版)》中規(guī)定，目前確診COVID-19的方法為使用實時熒光RT-PCR檢測新型冠狀病毒核酸陽性，或病毒基因測序，與已知的新型冠狀病毒高度同源。但疫情發(fā)展至今，核酸檢測試劑的漏檢問題一再暴露，陽性檢出率只有30％～50％，主要是由于采樣方式局限性造成的。核酸檢測，一般是通過收集鼻咽拭子、疑似患者的痰、血液、糞便，提取其中的RNA片段進行熒光RT-PCR，采樣過程中，會混入大量人體細胞、細菌，進而造成待測RNA豐度低，檢測系統(tǒng)無法檢測，最終導(dǎo)致假陰性的產(chǎn)生。同時，除抽血外，其余采樣方式，均會造成采樣人員暴露于可能含有病原體的環(huán)境中，有潛在的感染風(fēng)險。樣品制備過程，需要步驟多、操作時間長，對檢測人員的技術(shù)水平要求高。

在人體免疫應(yīng)答中，IgA抗體略晚于IgM抗體出現(xiàn)，早于IgG抗體，是人體抗感染的主要早期抗體，檢測陽性能夠提示新近發(fā)生感染。根據(jù)前期對SARS的研究結(jié)果以及對新型冠狀病毒最新的研究報道，病人在感染病毒后，會于3～7天左右會產(chǎn)生IgM抗體，隨后會產(chǎn)生IgA抗體，1周后IgG抗體也會上升，臨床上檢測IgM抗體、IgA抗體和IgG抗體能夠輔助診斷、監(jiān)控病情及判斷治療效果。在檢測IgM的同時，合并檢測IgA，能夠有效彌補IgM試劑可能存在的假陽性或漏檢，提高診斷準(zhǔn)確性，對縮短患者感染后檢測的窗口期有重要的臨床價值。

化學(xué)發(fā)光技術(shù)主要依據(jù)檢測體系中待測物濃度與體系的化學(xué)發(fā)光強度在一定條件下成定量線性慣性的原理，利用專用的儀器對化學(xué)發(fā)光強度進行檢測，從而確定待測物的含量，具有靈敏度高、報告速度快、自動化程度高等突出的優(yōu)點，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域。根據(jù)反應(yīng)原理，可將化學(xué)發(fā)光技術(shù)分為間接法、捕獲法、競爭法和夾心法，其中，其中，間接法是將抗原包被于固相表面，根據(jù)抗原-抗體結(jié)合的免疫學(xué)原理，能夠快速富集待測抗體，并通過合適的二抗，就能檢測出待測抗體的含量。

新型冠狀病毒基因編碼多種結(jié)構(gòu)蛋白，最為主要的是突刺蛋白(spikeglycoprotein,S)。S蛋白是可能最早被免疫系統(tǒng)識別的抗原。新型冠狀病毒利用高度糖基化的同源三聚體S蛋白進入宿主細胞。S蛋白經(jīng)歷很多種結(jié)構(gòu)重新排列后將病毒融合進入宿主細胞的細胞膜。這一過程包括病毒的S1亞基結(jié)合到宿主細胞受體上，引發(fā)三聚體不穩(wěn)定性的發(fā)生，S蛋白中3個RBD中的1個會向上螺旋突出，導(dǎo)致S1亞基的脫落和S2的折疊，從而使S蛋白更容易與宿主受體血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)結(jié)合。三聚體的主要狀態(tài)為三個受體結(jié)構(gòu)域(RBD)之一向上旋轉(zhuǎn)為受體可結(jié)合的構(gòu)象。生物物理和結(jié)構(gòu)證據(jù)表明，較之前的SARS冠狀病毒，新型冠狀病毒的三聚體更容易與細胞表面的ACE2蛋白結(jié)合。因此，RBD蛋白是作為新冠病毒早期診斷的最主要的蛋白位點。抗原的選擇會直接影響新型冠狀病毒IgA抗體檢測試劑的性能。同時，由于可能存在的IgM抗體和IgG抗體與抗原的競爭性結(jié)合，會使測量IgA抗體的準(zhǔn)確性和靈敏性有所下降，因此，如何解決這些問題，是準(zhǔn)確測量新型冠狀病毒IgA抗體所需要克服的主要問題。