[發明專利]杜鵑紅山茶不同組織器官熒光定量內參基因及應用

有效

• 申請號: 202010637319.0
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111662999B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 劉小飛;于波;孫映波;黃麗麗;徐曄春
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院環境園藝研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙) 11531
• 代理人: 于鵬

本發明公開了一種杜鵑紅山茶不同組織器官熒光定量內參基因及應用，所述內參基因為TUA和GAPDH。本發明提供的杜鵑紅山茶不同組織器官熒光定量內參基因，是杜鵑紅山茶不同組織器官、不同發育階段中表達最穩定的兩個內參基因，該兩個基因表達的穩定性優于現有技術中的其他基因，可在杜鵑紅山茶不同的基因型、不同發育階段、不同組織器官和不同脅迫條件下恒定表達，作為熒光定量內參基因應用在qRT?PCR中，獲得的實驗結果線性關系好、重復性好、準確性高，能為杜鵑紅山茶不同組織器官中獲得功能基因表達的精確定量數據提供有力支持，為杜鵑紅山茶基因功能研究提供理論基礎。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，尤其涉及杜鵑紅山茶不同組織器官熒光定量內參基因及應用。

背景技術

杜鵑紅山茶(Camellia azalea)為山茶科(Theaceae)山茶屬(Camellia) 常綠灌木或小喬木，自然分布于廣東省陽春市鵝凰嶂自然保護區，廣東省重點保護野生植物。杜鵑紅山茶花期長，夏秋兩季為盛花期，在適宜條件下可四季開花，是世界上唯一全年開花的山茶屬植物，為山茶屬植物的園林應用打開了廣闊的前景。目前，除了少量關于葉綠體基因組方面的研究，關于杜鵑紅山茶基因功能方面的研究較少，而篩選杜鵑紅山茶中適用的熒光實時定量PCR(qRT-PCR)內參基因可為杜鵑紅山茶基因功能研究提供理論基礎。

qRT-PCR由于其敏感性高及特異性好被廣泛應用于基因表達研究，而其結果的準確性在很大程度上取決于內參基因的穩定性。理想的內參基因應該在不同的基因型、不同發育階段、不同組織器官和不同脅迫條件下恒定表達，但事實上這樣的理想內參基因很難存在。因此，需要根據不同物種及不同試驗條件篩選合適的內參基因，這對獲得準確的qRT-PCR實驗結果是非常重要的。

發明內容

本發明的目的是提供一種穩定性高的杜鵑紅山茶不同組織器官熒光定量內參基因及應用。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

本發明首先提供了杜鵑紅山茶不同組織器官熒光定量內參基因，所述內參基因為TUA和GAPDH。

優選地，所述杜鵑紅山茶不同組織器官包括幼嫩根、成熟根、幼嫩葉片、成熟葉片、花蕾、露色期花瓣、成熟花瓣中的一種或多種。

更優選地，所述花蕾長度為0.5～1.5cm。

優選地，所述內參基因為TUA和GAPDH的引物擴增長度100～250個堿基對，引物序列長度18～25個堿基，GC含量45％～55％，TM值為(60± 3)℃。

更優選地，所述內參基因TUA的上游引物的核苷酸序列為： 5'-CGATAACGGTAGGTTCCAAGTCAA-3'，下游引物的核苷酸序列為： 5'-GGCAAGCAGGTATTCAGGTAGG-3'。

所述內參基因GAPDH的上游引物的核苷酸序列為： 5'-CAGTGGGAACACGGAAAGC-3'，下游引物的核苷酸序列為： 5'-TTGGCATCGTTGAGGGTCT-3'。

本發明還提供了上述的杜鵑紅山茶不同組織器官熒光定量內參基因在 qRT-PCR中的應用。

具體地，qRT-PCR的反應條件為：第一步預變性：95℃3min；第二步擴增：95℃5s，60℃30s，45個循環。

反應體系為：采用20μL反應體系，其中2X SybrGreen qPCR Master Mix 10μL、ddH₂O 7.2μL、10ng·μL^-1cDNA 2μL、10μM上游引物和10μM下游引物分別為0.4μL。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：