[發(fā)明專利]一株葡萄牙棒孢酵母菌株及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010624949.4
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN112094762B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發(fā)明（設計）人: 傅曼琴;徐玉娟;吳繼軍;余元善;溫靖;林羨
• 申請（專利權）人: 廣東省農業(yè)科學院蠶業(yè)與農產(chǎn)品加工研究所
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P17/06;C12R1/645
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

本發(fā)明公開了一株葡萄牙棒孢酵母，其命名為Clavispora lusitaniae CP?1，保藏編號為GDMCC No:61036；本發(fā)明還涉及葡萄牙棒孢酵母在發(fā)酵生產(chǎn)橙皮素中的應用以及生物轉化橙皮苷的方法。該菌株來源于陳皮，屬于公認安全菌株，可以在食品中應用，容易培養(yǎng)和保存，通過發(fā)酵所得的橙皮素產(chǎn)率可高達74.29％，達到了顯著提高產(chǎn)量的目的。

技術領域

本發(fā)明屬于微生物應用技術領域，具體涉及一株葡萄牙棒孢酵母CP-1(Clavispora lusitaniae CP-1)菌株及其在發(fā)酵生產(chǎn)橙皮素中的應用。

背景技術

橙皮苷是一種二氫黃酮苷，是柑桔中含量最為豐富的黃酮類物質之一，由苷元(橙皮素) 和蕓香糖組成，研究證實橙皮苷具抗炎、抗氧化、干擾腫瘤形成等多種生物活性，但是橙皮苷在柑桔果實中是以活性較低的糖苷形式存在，提取得到的橙皮苷其糖苷鍵并沒有斷開，這種糖苷鍵的存在特別是鼠李糖糖苷鍵的存在，阻礙了其被生物體消化吸收，降低了其生物利用率。橙皮苷的溶解性很差，它的水溶性和脂溶性都相當?shù)停沟盟灰妆簧锩割惱茫膊灰淄高^生物細胞膜，因而也限制了它在食品等領域中的應用。藥代動力學研究表明苷類成分腸道內難以吸收、腸內滯留時間較長而易受到腸道菌群的水解作用，苷經(jīng)腸道細菌代謝后被水解，生成苷元而發(fā)揮其藥理作用。因此，通過將苷類化合物轉化成其相應苷元來提高苷類化合物生物利用度的研究是近年研究熱點。

在上世紀70年代從柑桔中提取橙皮苷就已經(jīng)工業(yè)化生產(chǎn)了，這些橙皮苷大部分應用于醫(yī)藥和化妝品領域中，在食品和保健品領域幾乎沒有應用。因為橙皮苷中糖基的存在，經(jīng)人體口服后需要經(jīng)人體大腸中微生物分解后才能被吸收，未被分解的部分則隨大便排出體外，而對于腸胃功能不好的人則橙皮苷的藥效也會降低。至于人體皮膚吸收，也由于糖基的存在，降低了橙皮苷的親脂性，不易通過皮膚細胞，因此也會降低它對皮膚作用的效果。而去除糖基或部分糖基后，橙皮苷的衍生物在水溶性、脂溶性和生物利用率都會改善。

目前生產(chǎn)橙皮素主要是采用酸水解法和酶水解的。酶法水解溫度較低，水解反應較好控制，但是經(jīng)發(fā)酵產(chǎn)酶的產(chǎn)率并不高，價格昂貴，而且水解率較低，若酶系中含有多種酶，得到的反應產(chǎn)物仍然復雜，使得分離純化困難。酸水解能耗高，損失大，對環(huán)境污染嚴重。因此篩選一株高效轉化生產(chǎn)橙皮素的微生物具有非常重要的意義。

發(fā)明內容

本發(fā)明的第一個目的在于，提供一株高效轉化生產(chǎn)橙皮素的菌株。

本發(fā)明的第二個目的在于，提供上述菌株在在發(fā)酵生產(chǎn)橙皮素中的應用。

本發(fā)明的第三個目的在于，提供一種發(fā)酵生產(chǎn)橙皮素的方法。

本發(fā)明所采取的技術方案是：

本發(fā)明的第一個方面，提供一株高效轉化生產(chǎn)橙皮素的菌株，所述菌株為葡萄牙棒孢酵母CP-1(Clavispora lusitaniae CP-1)，已于2020年5月27日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCC No:61036。

根據(jù)本發(fā)明第一個方面所述的葡萄牙棒孢酵母CP-1(Clavispora lusitaniaeCP-1)，所述葡萄牙棒孢酵母CP-1(Clavispora lusitaniae CP-1)的生物學性質為：將菌種劃線接種于固體麥芽汁培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，菌落直徑3-5mm，菌落圓形埑狀，顏色乳白色，質地呈奶油狀，不透明，菌落邊緣呈毯狀。

根據(jù)本發(fā)明第一個方面所述的葡萄牙棒孢酵母CP-1(Clavispora lusitaniaeCP-1)，所述葡萄牙棒孢酵母CP-1(Clavispora lusitaniae CP-1)的分離純化方法包括如下步驟：

1.配置分離培養(yǎng)基并滅菌后倒平板得到桔皮粉培養(yǎng)基；

2.隨機取樣陳皮；

3.將陳皮樣品置于馬鈴薯培養(yǎng)液中，得到陳皮懸液并梯度稀釋；