[發明專利]豬偽狂犬病病毒gD蛋白單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202010621361.3
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN113861284B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 田克恭;王瑩;譚菲菲
• 申請（專利權）人: 洛陽普泰生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/68;A61K39/395;A61P31/22
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

本發明提供了偽狂犬病病毒單克隆抗體及單鏈抗體，以及含該單克隆抗體的疫苗組合物及其應用。該單克隆抗體對偽狂犬病病毒臨床毒株(含變異株、經典株)的中和效價明顯高于早期疫苗株的，可用于偽狂犬病病毒gD蛋白結構解析、中和活性位點、表位鑒定研究、變異株制備疫苗免疫后產生高滴度中和抗體的研究。含該單克隆抗體的疫苗組合物可用于制備預防和/或治療豬偽狂犬病和犬偽狂犬病相關疫病的藥物中的應用。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及豬偽狂犬病病毒gD蛋白單克隆抗體及其應用。

背景技術

偽狂犬病，又稱Aujeszky氏病，是由皰疹病毒科(Herpesviridae)α亞科中的豬皰疹病毒I型(Suid?herpesvirus?1strain，亦稱偽狂犬病病毒Pseudorabies?virus，PRV)所引起的豬、牛、羊、犬、貓、兔、鼠、野豬、貂、熊和狐等多種家畜、野生動物的一種以發熱、奇癢(除豬外)及腦脊髓炎為主癥的急性傳染病。豬的偽狂犬病在我國廣泛存在，危害嚴重，是制約規?；i場生產的主要疾病之一，可引起妊娠母豬流產、死胎或木乃伊胎，仔豬出現神經癥狀、麻痹、特別地20周齡內感染后100％死亡率，以及大中豬呼吸道癥狀等。

目前市售的疫苗廠家有40多個，為了更準確比較免疫效果，郭天成等(豬偽狂犬病毒Bartha株與變異株疫苗免疫后中和效價比較試驗,廣東畜牧獸醫科技,2017,42(4):46-47)采用中和試驗對疫苗免疫后的豬只進行中和抗體效價的量化檢測，結果發現PRV變異株疫苗免疫即使免疫次數少于原有Bartha株疫苗但免疫后的中和效價依然明顯高于原有Bartha株疫苗。免疫機理尚不清楚，無法為后期疫苗改進及相應診斷試劑產品的制備提供研發思路。

發明內容

為了解決現有技術的不足，本發明的目的在于制備一種豬偽狂犬病病毒單克隆抗體，該單克隆抗體對疫苗株和經典株、變異株的中和活性存在顯著差異。

本發明涉及一種特異性結合偽狂犬病病毒gD蛋白的單克隆抗體5F6的可變區，所述可變區包括重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區為SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列或其簡并序列編碼的氨基酸序列或其經過一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體；所述輕鏈可變區為SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列或其煎餅序列編碼的氨基酸序列或其經過一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體。

本發明還涉及一種特異性結合偽狂犬病病毒gD蛋白的抗體或其片段，所述抗體或其片段的重鏈可變區為SEQ.ID?No.1所示序列或其簡并序列編碼的氨基酸序列或其經過一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體；以及所述抗體或其片段的輕鏈可變區為SEQ.ID?No.2所示序列或其簡并序列編碼的氨基酸序列或其經過一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體。

作為本發明的一種實施方式，所述抗體或其片段為單克隆抗體、基因工程抗體；其中，所述基因工程抗體包括單鏈抗體、嵌合單克隆抗體、改形單克隆抗體；所述抗體或其片段仍保持特異性結合豬偽狂犬病病毒gD蛋白的能力。

作為本發明的一種實施方式，所述抗體或其片段為鼠源單克隆抗體5F6，所述鼠源單克隆抗體5F6重鏈可變區為SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列編碼、輕鏈可變區為SEQ?IDNo.2所示核苷酸序列編碼。

所述單克隆抗體5F6特異性結合偽狂犬病病毒gD蛋白，對PRV變異株、經典株、早期疫苗株的IFA效價≥1∶6400，ELISA效價≥1∶512000，表明與PRV不同類型的毒株均呈現良好的反應性；與豬源其它病毒均不反應，且僅與豬偽狂犬病病毒gD蛋白發生特異性反應；對PRV臨床毒株(含變異株、經典株)的中和效價明顯高于疫苗株的，具有顯著性差異。

作為本發明的一種實施方式，所述抗體或其片段為單鏈抗體5F6，所述單鏈抗體5F6重鏈可變區為SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列編碼、輕鏈可變區為SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列編碼。