[發明專利]一種母乳α-淀粉酶活性檢測方法

在審

• 申請號: 202010619456.1
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111676268A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 李達;康學軍
• 申請（專利權）人: 李達
• 主分類號: C12Q1/40
• 分類號: C12Q1/40;G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 肖明芳

本發明公開一種母乳α?淀粉酶活性檢測方法，包括如下步驟：將新鮮母乳樣本與飽和硫酸銨溶液混合，充分震蕩搖勻后，離心取清液，然后運用碘?淀粉比色法實現母乳α?淀粉酶活性測定。本方法能在實現澄清母乳樣本的同時，不損傷α?淀粉酶活性的目的，且不用大比例稀釋待測母乳，使得分光光度法能夠準確檢測母乳α?淀粉酶活性值。

技術領域

本發明涉及一種母乳α-淀粉酶活性檢測方法，尤其是對于母乳中含量極低的活性成分α-淀粉酶進行檢測的前處理方法。

背景技術

基于天然母乳的乳濁液特性，不論是天然底物淀粉檢測方法，還是分子組成確定底物(如還原性麥芽糖)的方法，均不能基于分光光度法有效檢測母乳α-淀粉酶活性，這就要求在檢測之前對母乳進行樣本前處理。

目前國、內外前處理方法有首先對母乳樣本高速離心去脂，并在特定的pH值下通過特定試劑(如磷酸鹽緩沖溶液等)進行稀釋一定比例，制成待測母乳樣本等方法。存在不能完全澄清母乳，基于分光光度法進行活性檢測會存在較大誤差等問題。

發明內容

發明目的：為解決現有技術中的技術問題，本發明提出一種母乳α-淀粉酶活性檢測方法，尤其是對于母乳中含量極低的活性成分α-淀粉酶進行檢測的前處理方法。

技術方案：為實現上述目的，本發明的技術方案如下：一種母乳α-淀粉酶活性檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：將新鮮母乳樣本與飽和硫酸銨溶液混合，充分震蕩搖勻后，離心取清液，然后運用碘-淀粉比色法實現母乳α-淀粉酶活性測定。

優選地，新鮮母乳與飽和硫酸銨溶液的體積比為1:1～1:5，進一步優選地，兩者體積比為1:1。

震蕩條件為：渦旋儀上震蕩1～5min，在一個優選的實施方案中，在渦旋儀上震蕩1min。

優選地，離心條件為離心2～10min，設定轉速為2000～10000r/min，在一個優選的實施方案中，離心條件為離心5min，轉速5000r/min。

在一個優選的實施方案中，按照如下方法進行測定：

(1)吸取1ml新鮮母乳于4ml規格塑料試管中，再加入1ml飽和硫酸銨溶液；

(2)將該塑料試管放于渦旋儀上震蕩1min，充分混勻；

(3)將塑料試管放入離心機內離心5分鐘，設定轉速為5000r/min；

(4)取離心后清液100μl于玻璃比色皿中，其中，所述玻璃比色皿中含2ml濃度為0.8mg/ml淀粉溶液；

(5)在避光條件下滴入碘/碘化鉀溶液，反應5～20min，優選地，在37℃保溫(避光)條件下反應5～20min后，滴入濃度為50mmol/L的碘/碘化鉀溶液，該溶液與玻璃比色皿中含有淀粉溶液的體積比為1：10～1：50，更優選地，比例為1：20；

(6)迅速放入可見分光光度儀中，讀取吸光度值Abs；

(7)將吸光度值Abs代入計算公式求取母乳α-淀粉酶活性值。

其中，以加入2ml濃度為0.8mg/ml淀粉溶液計，母乳α-淀粉酶活性值AMY的計算公式為(單位U/L)：

其中，代表測定管淀粉的水解程度，大小范圍為0～1，含義為在實驗條件下，100μl離心清液中的淀粉酶在15分鐘內水解0.4mg淀粉，則其活性為800個單位。

有益效果：與現有技術相比，本發明具有如下優點：

(1)本發明意外的發現，采用飽和硫酸銨溶液作為反應試劑，能在實現澄清母乳樣本的同時，不損傷α-淀粉酶活性的目的，且不用大比例稀釋待測母乳(母乳α-淀粉酶活性極低)，使得分光光度法能夠準確檢測母乳α-淀粉酶活性值；