[發(fā)明專利]一種同時(shí)測(cè)定DON毒素及NIV毒素的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010618732.2
• 申請(qǐng)日: 2020-06-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111751466A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳璨;彭逸;盧杰;梁坤;司紅起;馬傳喜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)測(cè)定谷物中DON毒素和NIV毒素的方法。本發(fā)明使用多功能凈化柱凈化樣品后使用液相色譜儀同時(shí)檢測(cè)DON毒素與NIV毒素的方法，極大的縮短了實(shí)驗(yàn)的流程并擁有較高的回收率與精密度。本方法簡(jiǎn)單有效、經(jīng)濟(jì)可靠，為谷物產(chǎn)品安全提供了一個(gè)新的技術(shù)保障。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種測(cè)定谷物中真菌毒素的方法，具體涉及一種同時(shí)測(cè)定DON毒素及NIV毒素的方法。

背景技術(shù)

赤霉病，又被稱作小麥“癌癥”，在我國(guó)中部地區(qū)小麥種植區(qū)域發(fā)病較嚴(yán)重，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，一般是由鐮孢屬真菌引起，在小麥抽穗揚(yáng)花時(shí)侵染小麥。赤霉菌的代謝 毒素主要包含DON毒素及其衍生物、NIV毒素、ZEN毒素、FB毒素等，這些毒素或 多或少都影響到人類及家畜的健康安全。

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON毒素)又稱嘔吐毒素，是因?yàn)槿嘶蚣倚蠼佑|定量的該 毒素后會(huì)產(chǎn)生腹瀉、頭暈、嘔吐、腹痛、惡心等一系列癥狀，具有一定的致癌性，是 我國(guó)谷類污染物常見(jiàn)的真菌毒素之一。雪腐鐮刀菌烯醇(NIV毒素)毒性要強(qiáng)于DON 毒素，除了常見(jiàn)的嘔吐癥狀之外，其對(duì)家畜的皮膚組織、造血組織、心血系統(tǒng)以及神 經(jīng)系統(tǒng)也會(huì)有一定影響。因此，DON毒素是我國(guó)對(duì)小麥制品品質(zhì)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)之一，我 國(guó)對(duì)谷內(nèi)作物產(chǎn)品中DON毒素的標(biāo)準(zhǔn)是1000ug/kg，但是對(duì)NIV毒素卻沒(méi)有過(guò)多要 求，國(guó)家對(duì)谷內(nèi)農(nóng)產(chǎn)品中的NIV毒素也需要有所防范。對(duì)DON毒素及NIV毒素定量 檢測(cè)對(duì)小麥品質(zhì)檢測(cè)測(cè)定具有重大意義。

關(guān)于DON毒素的檢測(cè)方法，到目前為止，這些檢測(cè)方法大多已經(jīng)成熟且可以應(yīng) 用在絕大多數(shù)小麥的毒素檢測(cè)當(dāng)中。主要包括薄層層析法(thin layer chromatography，TLC)、氣相色譜法(gas chromatography，GC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gaschromatography-mass spectrometry，GC-MS)、氣象色譜-電子捕獲檢測(cè)器聯(lián)用(gaschromatography-electron-capture detection，GC-ECD)、高效液相色譜法(highpressure liquid chromatography，HPLC)、液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用(liquidchromatography-mass spectrometry，LC-MS)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme linkedimmunosorbent assays， ELISA)等，這些方法各有各的優(yōu)缺點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)者可以根據(jù)自己的需求來(lái)選擇合適的方 法檢測(cè)。關(guān)于NIV毒素的檢測(cè)，一般來(lái)說(shuō)，NIV毒素的測(cè)定都是和DON毒素一起。 梁穎曾用氣相色譜-質(zhì)譜同時(shí)檢測(cè)飼料中的DON毒素和NIV毒素，硅烷化衍生后測(cè)出兩種毒素的檢出限分別為6ng/g和8ng/g；張偉曾用固相萃取-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 聯(lián)用法檢測(cè)出NIV毒素的檢出限為2ug/kg；馬玉彤等人用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 儀測(cè)出小麥中的NIV毒素的平均檢出限為182.56ug/kg。就目前的技術(shù)來(lái)說(shuō)，谷物測(cè)量 中一般可以測(cè)定NIV毒素的方法大多可以測(cè)定DON毒素，但是測(cè)定DON毒素的方 法雖然可以檢測(cè)到NIV毒素，但是回收率偏低。因此，為了確保小麥等谷物測(cè)量的效 率與安全，開(kāi)發(fā)出一些可以同時(shí)檢測(cè)DON毒素與NIV毒素的方法是十分有意義的。

目前關(guān)于利用Mycosep#227、Mycosep#226多功能凈化柱凈化小麥籽粒樣品，用C18色譜柱高效液相色譜分離檢測(cè)來(lái)同時(shí)檢測(cè)DON毒素和NIV毒素的方法還未有報(bào) 道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的主要是解決小麥等谷物測(cè)量中DON毒素與NIV毒素檢測(cè)的效率低下、測(cè)量結(jié)果不準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)過(guò)程復(fù)雜等問(wèn)題，提供一種新型、操作便捷、結(jié)果準(zhǔn)確的 同時(shí)測(cè)定DON毒素及NIV毒素的方法。

本發(fā)明提供的同時(shí)測(cè)定谷物中DON毒素和NIV毒素的方法，包括：

所述DON毒素代表脫氧雪腐鐮刀菌烯醇；

所述NIV毒素代表雪腐鐮刀菌烯醇；

1)將待測(cè)谷物樣品置于溶劑中超聲萃取，過(guò)濾收集濾液；