[發(fā)明專利]一種同時測定DON毒素及NIV毒素的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010618732.2
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111751466A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳璨;彭逸;盧杰;梁坤;司紅起;馬傳喜
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種同時測定谷物中DON毒素和NIV毒素的方法，包括：

所述DON毒素代表脫氧雪腐鐮刀菌烯醇；

所述NIV毒素代表雪腐鐮刀菌烯醇；

1)將待測谷物樣品置于溶劑中超聲萃取，過濾收集濾液；

2)將步驟1)所得濾液上樣于多功能凈化柱，收集流出液吹干，再加入流動相溶解，過濾收集濾液；

3)標準曲線的繪制：

采用高效液相色譜法檢測標準品溶液，收集流出液，以各標準峰面積為縱坐標，，以所述標準品溶液的濃度為橫坐標，單位為ug/ml，進行擬合，得到DON毒素和NIV毒素的標準曲線；

所述標準品溶液為DON毒素的標準溶液和NIV毒素的標準溶液；

4)待測谷物樣品中DON毒素和NIV毒素含量的測定：

按照與步驟3)相同的色譜檢測條件，采用高效液相色譜法檢測所述步驟2)所得濾液，收集流出液，將所得流出液縱坐標與步驟3)所得標準曲線對比，即可得到所述待測谷物樣品中DON毒素和NIV毒素的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中，所述溶劑選自乙腈、水中至少一種；具體選自由乙腈和水組成的混合液；所述混合液中，乙腈和水的體積比為80-90：16；具體為84:16；

所述待測谷物樣品與溶劑的用量比為20-30g：100mL；具體為25g：100mL；

所述超聲萃取步驟中，溫度為30-38℃；具體為35℃；時間為20-40min；具體為30min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中，所述多功能凈化柱為Mycosep#227或Mycosep#226；

所述濾液的用量為0.8-1倍柱體積；具體為10ml；

所述吹干步驟中，溫度為50-58℃；具體為55℃；所用設(shè)備為氮吹儀；

所述流動相為由水、乙腈和甲醇組成的混合液；所述水、乙腈和甲醇的體積比為90:5:5；

所述過濾步驟中，濾膜孔徑為0.22um。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步驟3)中，高效液相色譜儀檢測的條件如下：

色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm，5um；

等度洗脫流動相：由體積比為90:5:5的水、乙腈和甲醇組成的混合液；

流速：1.0ml/min；

檢測波長：λ＝218nm；

柱溫：40℃；

進樣量：20ul。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述步驟3)中，保留時間為14.7099min的為所述DON毒素；

保留時間為7.407min的為所述NIV毒素。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述步驟3)中，所得DON毒素標準曲線為Y＝25.5029X-3.7918

所得NIV毒素的標準曲線為Y＝41.3470X+3.0784；

其中，Y均為標準峰面積；X為溶液的濃度，單位為ug/ml。