[發(fā)明專利]一種siRNA遞送系統(tǒng)復合物及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010613003.8
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111714468B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設計）人: 王志民;朱誠身;劉文濤;張向陽;何素琴;王堯河;劉浩;黃淼銘;張成林;秦斌;黃磊
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K31/713;A61K47/36;A61K47/54;A61K47/64;A61P35/00;A61P35/04;B82Y5/00;B82Y30/00;B82Y40/00
• 代理公司: 鄭州豫原知識產權代理事務所(普通合伙) 41176
• 代理人: 李保林

本發(fā)明涉及基因治療及納米靶向遞送技術領域，具體涉及一種siRNA遞送系統(tǒng)復合物及其制備方法和用途。制備全過程為：先由Boc保護的組氨酸與膽固醇反應生成Boc保護的組氨酸膽固醇基酯，后在三氟乙酸中脫BOC釋放保護的氨基生成組氨酸膽固醇基酯，后由氨基與羧甲基殼聚糖的羧基反應修飾到長鏈羧甲基殼聚糖生成組氨酸膽固醇基酯修飾的羧甲基殼聚糖，對組氨酸膽固醇基酯修飾的羧甲基殼聚糖進行靶向標記生成組氨酸膽固醇基酯與靶向標記物共同修飾的羧甲基殼聚糖高分子化合物，然后在臨界膠束濃度以上通過自組裝形成穩(wěn)定的球狀遞送載體，與siRNA混合，制得siRNA遞送系統(tǒng)復合物，其具有較好的靶向性，環(huán)境響應性，siRNA穩(wěn)定性。

技術領域

本發(fā)明涉及基因治療及納米靶向遞送技術領域，具體涉及一種siRNA遞送系統(tǒng)復合物及其制備方法和用途。

背景技術

RNA干擾(RNA interference)是生物進化過程中遺留下來的一種在轉錄后通過siRNA調控基因表達的機制。RNA干擾之所以能引起生物醫(yī)學界幾乎所有研究領域的廣泛關注，不僅是因為理論上說人類細胞中任何基因基本上都能被siRNA沉默，更是因為siRNA具有強大的抑制基因表達的效應和高度的序列特異性。siRNA強大的沉默效應表現在與反義寡核苷酸和核酶等抑制基因表達的傳統(tǒng)工具相比較,具有高達數十到數千倍基因沉默效率。siRNA高度的序列特異性表現在與目基因mRNA相差一個堿基序列的siRNA的基因沉默效應將大大受到削弱，從而保證了抑制目標基因的高度特異性。因此，siRNA作為一種極具前景的基因靶向藥物，可廣泛地用于諸如癌癥等基因性疾病的治療。然而，由于siRNA較低的穩(wěn)定性與較差的藥代動力學以及體內的各種生物屏障等原因，siRNA具有較差的體內治療效果。因此，如何保持siRNA遞送過程的穩(wěn)定性、目標組織有效治療劑量的積累以及細胞的高效內化，依然是限制siRNA臨床轉化及大規(guī)模應用的主要問題。

生物體內，尤其人的體內，任何一級生物屏障對于藥物的治療效果具有重要的影響作用。注射的藥物經過各級屏障的清除及截留后最終到達作用部位及進入特定細胞的藥物只有注射計量的0.7％左右。這一方面解釋了藥物治療特別是對腫瘤進行化療的毒副作用較大，身體免疫反應性較強，而治療效果卻較差的原因另一方面也說明即使研究者們對各種納米載體進行具有多功能的設計，但是由于不能同時滿足克服每一級的體內生物障礙，致使不能達到最終的較好的治療效果因此，需要在深入理解體內各種疾病狀態(tài)下各級生物屏障的演變機制的前提下，重新優(yōu)化各種設計賦予納米藥物載體腫瘤靶向性以及其他的能力從而克服體內各級屏障，實現高效的腫瘤靶向遞送。

研究表明，雖然表面帶正電荷的納米載體對表面帶有一定的負電荷的細胞具有較好的黏附作用進而促進細胞的攝取，然而在體內血液循環(huán)系統(tǒng)中，表面具有正電荷的納米載體復合物易與各種調理蛋白結合，后被單核巨噬系統(tǒng)通過肝臟和脾臟快速的清除。因此，通過改變納米載體表面電荷來達到減少單核巨噬系統(tǒng)的清除，延長體內循環(huán)時間，增加細胞黏附攝取率以及提高溶酶體逃逸能力的目的若要提高在納米載體遞送過程中到達腫瘤的部位的效率，必須克服這種各級生物屏障之間的矛盾。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的之一是提供一種siRNA遞送系統(tǒng)復合物的制備方法，包括如下步驟：

S1、將膽固醇與Boc保護的組氨酸加入到二氯甲烷中，繼續(xù)向二氯甲烷中加入二環(huán)己基碳二亞胺和4-二甲氨基吡啶，室溫反應14-16h，依次將白色析出物過濾掉、減壓下除去溶劑、純化，得到Boc保護的組氨酸膽固醇基酯中間體；

S2、將S1制得的Boc保護的組氨酸膽固醇基酯中間體溶于二氯甲烷，繼續(xù)加入三氟乙酸，攪拌1-1.5h，然后用質量分數為36.6％的氨水溶液中和，減壓蒸發(fā)溶劑，將殘余物在乙酸乙酯中稀釋，依次洗滌、干燥，再次減壓蒸發(fā)溶劑得到白色粉末狀的組氨酸膽固醇基酯中間體；