[發明專利]一種乙型肝炎表面抗原檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202010598229.5
• 申請日: 2020-06-28
• 公開（公告）號: CN111707827A
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 張振斌;李華;史光輝;欒大偉;劉萍
• 申請（專利權）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 王曉英

本發明提供了一種乙型肝炎表面抗原檢測試劑盒，包括堿性磷酸酶標記F(ab')₂HBsAg羊多抗，磁微粒?HBsAg抗體。本發明試劑盒中，抗體直接包被磁微粒具有更好的反應效率，有助于提高靈敏度；一些非特異性的結合是發生在抗體的FC端，而且切去后抗體Fab₂分子量會小些，也助于提高靈敏度。

技術領域

本發明屬于免疫分析醫學技術領域，尤其是涉及一種乙型肝炎表面抗原檢測試劑盒。

背景技術

乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B Virus Surface Antigen，HBsAg)，是乙肝病毒的外殼蛋白。由226個氨基酸殘基組成，相對分子質量24 000(糖基化形式27 000)。在HBV感染者血清中，以直徑17～25nm的小圓形顆粒和長度不等的管狀或絲狀顆粒形式存在。

HBsAg不僅存在于血液中，還存在于許多體液和分泌物中，如唾液、乳汁、汗液、淚液、尿液、鼻咽分泌物、精液等。血清HBsAg僅為HBV感染的標志，不能反映病毒有無復制、復制程度、傳染性強弱及預后。急性乙型肝炎患者大部分可在病程早期轉陰，慢性乙型肝炎患者該指標可持續陽性。

酶聯免疫吸附法(ELISA)因操作簡單，無放射性污染，價格較低，被廣泛應用，但其靈敏度較低。檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，檢測結果的準確度和精密度較差。

PCR技術，DNA擴增的高效性導致了極微量的污染即可出現假陽性，因而使結果失真。此外病毒作為外原基因的入侵者，必須在闡明其全部或部分核苷酸序列時，才可以設計引物或探針，進行核酸分子雜交和PCR檢測。

發明內容

有鑒于此，本發明旨在提出一種靈敏度高、特異性好的乙型肝炎表面抗原檢測試劑盒。

一種乙型肝炎表面抗原檢測試劑盒，包括堿性磷酸酶標記F(ab')₂HBsAg羊多抗，磁微粒-HBsAg抗體。

優選的，堿性磷酸酶標記F(ab')₂HBsAg羊多抗的工作濃度為0.01～0.5μg/mL；磁微粒-HBsAg抗體的工作濃度為0.1-2mg/mL。

優選的，堿性磷酸酶標記F(ab')₂HBsAg羊多抗的制備包括如下步驟，

1)待標記原料F(ab')₂HBsAg羊多抗裝入透析袋中，用0.02-0.05M的碳酸鹽緩沖液，透析30min；

2)將標記原料F(ab')₂HBsAg羊多抗與活化的堿性磷酸酶按質量比1:(1-4)進行混合，之后用0.02-0.05M碳酸鹽緩沖液于4℃透析16-24h，期間換液2-3次；

3)配制濃度為2-5mg/mL的NaBH₄水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例進行混合，并于4℃避光反應2h；

4)將上述步驟3)完成的標記液用0.01M PBS于4℃透析24h，加入等體積甘油，-20℃保存。

優選的，活化的堿性磷酸酶的制備，包括如下步驟，

1)配制2-15mg/mL ALP溶液；

2)配制10-20mg/mL過碘酸鈉NaIO₄溶液；

3)將上述1)和2)配制溶液按體積比1：1混勻，室溫避光反應30min；

4)配制濃度為20-50μL/mL的乙二醇水溶液，與上述溶液3)以相同體積混合，常溫避光反應30min，活化即完成，放-20℃保存。