[發(fā)明專利]犬類糞便中絳蟲與孢子蟲三重PCR檢測引物、方法與試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010595505.2 | 申請日： | 2020-06-28 |
| 公開（公告）號： | CN111607656A | 公開（公告）日： | 2020-09-01 |
| 發(fā)明（設計）人： | 楊帆;馬春江;張志新;阿不都熱衣木·賽提;方先珍;張國新;買吾蘭·孜克牙;張婉琪;張軍;玉努斯·阿不都;楊夷平;關團;陳建豪;段進剛;阿達來提·尤素甫;古麗巴哈爾·卡德爾;楊康;帕提古麗·吾馬爾;坤巴哈斯·沙合依;葛忠 | 申請（專利權）人： | 哈密市動物疫病預防控制中心 |
| 主分類號： | C12Q1/6893 | 分類號： | C12Q1/6893;C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 839000 新疆維吾爾自*** | 國省代碼： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 糞便 絳蟲 孢子 三重 pcr 檢測 引物 方法 試劑盒 | ||
1.一種犬類糞便中絳蟲與孢子蟲三重PCR檢測引物，其特征在于，
所述的絳蟲為細粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲，所述的孢子蟲為微小隱孢子蟲和犬隱孢子蟲；
所述的引物為：
細粒棘球絳蟲引物1：5'-CGTTGTCCTCGTCGTATT-3'；
細粒棘球絳蟲引物2：5'-AACAGCCGTCTTCACATC-3'；
目標片段長度515bp；
多房棘球絳蟲引物1：5'-TTGATTATTGGAGGCTATGC-3'；
多房棘球絳蟲引物2：5'-CAACGACAACATAACATCAC-3'；
目標片段長度353bp；
微小隱孢子蟲和犬隱孢子蟲共用引物1：5'-CTCAACTCAAGCCACCAT-3'；
微小隱孢子蟲和犬隱孢子蟲共用引物2：5'-CCGACCAAGACAACATCA-3'；
目標片段長度186bp。
2.一種犬類糞便中絳蟲與孢子蟲三重PCR檢測試劑盒，其特征在于，
所述的絳蟲為細粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲，所述的孢子蟲為微小隱孢子蟲和犬隱孢子蟲；
所述試劑盒中包含如權利要求1中全部所述的引物。
3.根據(jù)權利要求2所述的犬類糞便中絳蟲與孢子蟲三重PCR檢測試劑盒，其特征在于，
所述試劑盒中用于進行所述三重PCR檢測的反應體系如下：
按體積份數(shù)計，包括：20-25份的PCR緩沖液、4-6份的全部引物（等量）、2-3份的含脫氧核糖的脫氧核苷三磷酸以及50-60份的DECP水。
4.一種犬類糞便中絳蟲與孢子蟲三重PCR檢測方法，所述方法不以疾病的診斷和治療為目的，
其特征在于，
包括：制備引物步驟，DNA提取步驟，PCR步驟以及電泳檢測步驟；
其中，所述的PCR步驟使用了如權利要求2或3所述的犬類糞便中絳蟲與孢子蟲三重PCR檢測試劑盒。
5.根據(jù)權利要求4所述的犬類糞便中絳蟲與孢子蟲三重PCR檢測方法，其特征在于，
在所述的制備引物步驟之前包括引物設計步驟；
在所述的引物設計步驟中，根據(jù)細粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲、微小隱孢子蟲，或，根據(jù)細粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲、犬隱孢子蟲的線粒體基因組序列blast的比對分析結果，基于引物必須具備特異性以及引物擬擴增的DNA片段大小必須具備明顯的差異的原則對引物進行設計；
通過所述的引物設計步驟獲得的引物如下：
細粒棘球絳蟲引物1：5'-CGTTGTCCTCGTCGTATT-3'；
細粒棘球絳蟲引物2：5'-AACAGCCGTCTTCACATC-3'；
目標片段長度515bp；
多房棘球絳蟲引物1：5'-TTGATTATTGGAGGCTATGC-3'；
多房棘球絳蟲引物2：5'-CAACGACAACATAACATCAC-3'；
目標片段長度353bp；
微小隱孢子蟲和犬隱孢子蟲共用引物1：5'-CTCAACTCAAGCCACCAT-3'；
微小隱孢子蟲和犬隱孢子蟲共用引物2：5'-CCGACCAAGACAACATCA-3'；
目標片段長度186bp。
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