[發明專利]高純度抗蛇毒血清及其制備方法

有效

• 申請號: 202010594081.8
• 申請日: 2020-06-24
• 公開（公告）號: CN111748031B
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 方凱萍;劉海昌;朱復培;楊乾敏;時樂
• 申請（專利權）人: 浙江毓昌生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/22
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 趙志鵬

本發明公開了一種高純度抗蛇毒血清及其制備方法。本發明主要是通過溴化氰活化多糖類載體、毒蛇毒素偶聯溴化氰活化多糖類載體及采用親和層析的方法提純抗蛇毒血清F(ab’)2得到高純度抗蛇毒血清。采用本發明的制備方法獲得高中和效價的抗蛇毒血清制品，具有很好的中和蛇毒素的功能的同時，大幅度降低了制品中無中和毒性作用的蛋白量，可以明顯降低因異種蛋白引起的過敏反應發生率以及減輕過敏反應的嚴重程度。另外，本發明制備方法簡單，條件溫和，適于大規模推廣應用。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種高純度抗蛇毒血清及其制備方法。

背景技術

毒蛇，英文Viper，是指能分泌特殊毒液的蛇類，是性格狡猾，出擊狠毒的捕食者，敏銳的感官讓獵物無處逃竄，詭異的攻擊讓死亡如影隨形。中國的毒蛇有40余種，多分布于長江以南的廣大省份，其已知的分布地區有安徽、重慶、江西、浙江、福建、湖南、湖北、廣西、貴州、廣東及臺灣省。毒蛇中有10大劇毒的蛇，包括銀環蛇、五步蛇、眼鏡王蛇、舟山眼鏡蛇、原矛頭蝮、白唇竹葉青、白眉蝮、灰藍扁尾海蛇、圓斑蝰蛇、金環蛇。

蛇毒是復雜的物質，主要是具有酶活性的蛋白質。蛇毒按其性質可分為：神經毒、血循毒、混合毒三大類。大多數毒蛇的蛇毒所含的毒性蛋白成分可引起局部和全身作用，這些作用可引起局部組織損害，血管損傷，溶血，彌漫性血管內凝血(DIC)樣(去纖維蛋白)綜合征和肺、心、腎及神經病變。以五步蛇為例，其奇毒無比，之所以稱五步蛇意指人類只要曾被其所咬，腳下踏出五步內必然會毒發倒地。根據調查資料顯示，由五步蛇咬傷所致的死亡事件，在我國是較為常見的。【趙爾宓、黃美華等主編《中國動物志爬行綱第三卷》科學出版社1998年版390頁】。

世界衛生組織關于“毒蛇咬傷處理準則”(Guidelines for the management ofsnake-bites，World Health Organization 2010)中明確提出抗蛇毒血清是治療蛇毒的唯一有效解毒劑，是治療蛇毒引起全身中毒的基本藥物。在臨床實踐中也發現，盡管用了傳統醫學的方法進行治療，最終還需抗蛇毒血清才能挽回病人的生命。

抗蛇毒血清是治療毒蛇咬傷病人的特效解藥，現在市售的抗蛇毒血清每毫升能中和2毫克左右的蛇毒，每劑(10毫升)大約能中和20毫克毒素，治療一個毒蛇咬傷病人大約需要3-8劑抗蛇毒血清。市售的抗蛇毒血清系采用滅活的毒蛇毒素免疫馬匹，待馬匹產生特異抗蛇毒抗體后，采取馬匹的血漿，經胃蛋白酶消化去除F(ab’)2抗體的Fc片段、純化獲得F(ab’)2片段而成。盡管這種抗血清的抗體F(ab’)2含量在90％左右，但是其能中和毒素的有效F(ab’)2成分僅只占總F(ab’)2量的10％左右，其余F(ab’)2對毒素無中和作用。另外，馬F(ab’)2以及其它馬血清蛋白對于人體而言是異種蛋白，大劑量異種蛋白進入人體后可以引起過敏反應，尤其是血清病(III型過敏反應)，發病率高、病情嚴重、持續時間長。

發明內容

針對現有技術中的不足，本發明的目的主要在于提供一種高純度抗蛇毒血清，其具有遠高于市售抗蛇毒血清中能中和毒素的有效F(ab’)2成分，可以降低抗蛇毒血清的劑量。

本發明的目的還在于提供一種所述高純度抗蛇毒血清的制備方法，該方法能除去與中和抗體無關的其它蛋白，提高抗蛇毒血清的純度，來減少血清病的發病率、減輕病癥、縮短病程。

為實現前述發明目的，本發明采用的技術方案包括：

本發明的一些實施方案之中提供的一種高純度抗蛇毒血清的制備方法包括：a)溴化氰活化多糖類載體，b)毒蛇毒素偶聯溴化氰活化多糖類載體，c)采用親和層析的方法提純抗蛇毒血清F(ab’)2。

其中，所述毒蛇毒素選自新鮮采取的毒蛇毒素、用乙二胺四乙酸(EDTA)處理的毒蛇毒素、用苯甲基磺酰氟(PMSF)處理的毒蛇毒素或用乙二胺四乙酸(EDTA)及苯甲基磺酰氟(PMSF)處理的毒蛇毒素的一種或它們的混合物。