[發明專利]一種新型冠狀病毒核酸檢測引物探針組合物、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010588373.0
• 申請日: 2020-06-24
• 公開（公告）號: CN111621604A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 方耀東;陳林;李明陽;韓麗;張文學;古迪
• 申請（專利權）人: 上海五色石醫學研究股份有限公司;上海五色石醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 杭州創信知識產權代理有限公司 33383
• 代理人: 吳清珠

1.一種新型冠狀病毒核酸檢測引物探針組合物，其特征在于，包括：

第一引物探針組，包括正向引物ORF1ab-F，探針ORF1ab-P和反向引物ORF1ab-R，其核苷酸序列分別如SEQ ID No.1～3所示；

第二引物探針組，包括正向引物N-F，探針N-P和反向引物N-R，其核苷酸序列分別如SEQID No.4～6所示；

第三引物探針組，包括正向引物Rpp30-F，探針Rpp30-P和反向引物Rpp30-R，其核苷酸序列分別如SEQ ID No.7～9所示。

2.根據權利要求1所述的一種新型冠狀病毒核酸檢測引物探針組合物，其特征在于，所述探針ORF1ab-P、探針N-P和探針Rpp30-P的5’端標記有熒光基團，3’端標記有熒光淬滅基團。

3.根據權利要求2所述的一種新型冠狀病毒核酸檢測引物探針組合物，其特征在于，所述熒光基團選自FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red和CY3中的至少1種。

4.根據權利要求2所述的一種新型冠狀病毒核酸檢測引物探針組合物，其特征在于，所述熒光淬滅基團選自MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3和TAMRA中的至少1種。

5.一種包含如權利要求1-4任一所述的引物探針組合物的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒，其特征在于，包括引物探針組合物容器，內外質控容器，逆轉錄反應和PCR擴增反應容器，所述引物探針組合物容器內含有核苷酸序列如SEQ ID No.1～9所示的引物探針干粉或者溶液；所述內外質控容器內含有核苷酸序列如SEQ ID No.10～12所示的干粉或者溶液；所述逆轉錄反應和PCR擴增反應容器包括逆轉錄酶、DNA聚合酶、輔助增強劑和緩沖液。

6.根據權利要求5所述的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液的pH值控制在7.5～9.5。

7.根據權利要求5所述的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒，其特征在于，還包括陽性對照組和陰性對照組，所述陽性對照組為新型冠狀病毒COVID-19核酸或者假病毒顆粒；所述陰性對照組為人源性樣本管家基因假病毒顆粒。

8.一種采用如權利要求1-4任一所述的引物探針組合物進行新型冠狀病毒核酸檢測的方法，其特征在于，用于非診斷目的，包括以下步驟：

(1)對新型冠狀病毒樣本進行核酸提取、純化，得核酸提取液；

(2)以核酸提取液為模板，建立包含所述引物探針組合物的熒光定量PCR體系；

(3)通過熒光定量PCR檢測系統對含模板的PCR反應混合液進行檢測，根據得到的不同熒光信號數據判斷患者是否感染新型冠狀病毒。

9.根據權利要求8所述的新型冠狀病毒核酸檢測的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述熒光定量PCR體系包括新型冠狀病毒ORF1ab、N基因和人源性樣本管家基因的引物探針混合液。

10.根據權利要求8所述的新型冠狀病毒核酸檢測的方法，其特征在于，所述人源性樣本管家基因選自Rnase P的蛋白亞單位Rpp 20、Rpp30、Rpp40，GAPDH和β-actin中的至少1種。