[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010587667.1
• 申請(qǐng)日: 2020-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111735964A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何皓
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳市光與生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/533;C09K11/02;C09K11/77
• 代理公司: 合肥廣源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 34129
• 代理人: 胡麗虹

1.一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法，其特征在于，包括免疫熒光探針、檢測(cè)基板以及被檢測(cè)樣品；

所述免疫熒光探針為通過(guò)在高濃度稀土摻雜上轉(zhuǎn)換納米材料顆粒表面修飾免疫檢測(cè)所需要的生物活性分子A得到；

所述檢測(cè)基板為通過(guò)在基板上修飾用于捕獲被檢測(cè)物的生物活性分子B；

所述被檢測(cè)樣品中含有被檢測(cè)物，所述被檢測(cè)物為病原體、微生物、大分子抗原或抗體；

所述被檢測(cè)物為病原體、微生物或大分子抗原時(shí)，生物活性分子A為可與被檢測(cè)物特異性結(jié)合的抗體A，生物活性分子B為可與被檢測(cè)物特異性結(jié)合的抗體B；所述被檢測(cè)物為抗體時(shí)，生物活性分子A為可被被檢測(cè)物特異性識(shí)別的抗體A，生物活性分子B為可被被檢測(cè)物特異性識(shí)別的抗原；

在檢測(cè)時(shí)，將被檢測(cè)樣品用緩釋液稀釋后滴加到檢測(cè)基板上，被檢測(cè)物與生物活性分子B結(jié)合，完成后沖洗檢測(cè)基板，然后滴加用緩釋液稀釋的免疫熒光探針，使生物活性分子A與已經(jīng)和生物活性分子B結(jié)合的被檢測(cè)物結(jié)合，完成后沖洗檢測(cè)基板，洗去未結(jié)合的免疫熒光探針；將前述處理后的檢測(cè)基板置于熒光顯微鏡下，使用近紅外光作為激發(fā)光源，可見(jiàn)光波段作為檢測(cè)波段，對(duì)整個(gè)檢測(cè)基板進(jìn)行熒光成像，對(duì)免疫熒光探針數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)，所得數(shù)目即為被檢測(cè)樣品中被檢測(cè)物的數(shù)目。

2.如權(quán)利要求1所述一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法，其特征在于，所述高濃度稀土摻雜上轉(zhuǎn)換納米材料顆粒中稀土摻雜比例大于2%。

3.如權(quán)利要求1所述一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法，其特征在于，所述高濃度稀土摻雜上轉(zhuǎn)換納米材料顆粒的粒徑為10-100nm。

4.如權(quán)利要求1所述一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法，其特征在于，所述檢測(cè)基板為對(duì)基板醛基化修飾后修飾。

5.如權(quán)利要求4所述一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法，其特征在于，所述基板為玻璃片或硅片。

6.如權(quán)利要求1所述一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法，其特征在于，所述激光光源的波長(zhǎng)為790nm、980nm或1550nm，所述激光光源通過(guò)顯微鏡光路的能量密度大于1W/cm2。

7.如權(quán)利要求1所述一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法，其特征在于，所述免疫熒光探針是以NaYF₄、NaGdF₄、CaF₂、LiYF₄、NaLuF₄、LiLuF₄、KMnF₃或Y₂O₃為發(fā)光基質(zhì)，與敏化劑和激活劑共摻雜后得到上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒UCNPs，然后對(duì)UCNPs顆粒表面經(jīng)羧基化修飾得到羧基化修飾納米顆粒UCNP@PEG-COOH，再由生物活性分子A修飾得到熒光探針。

8.如權(quán)利要求1所述一種基于上轉(zhuǎn)換熒光探針的單分子免疫檢測(cè)方法，其特征在于，所述緩釋液為質(zhì)量濃度為0.2mol/L的PB緩沖液，所述PB緩沖液中溶質(zhì)按質(zhì)量百分比包括0.1%BSA、2%蔗糖、0.1%Tween。