[發明專利]甘草抗氧化活性成分的快速定量篩選方法及其應用

有效

• 申請號: 202010581039.2
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111751465B
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發明（設計）人: 周蒙;周倩;戴衍朋;蔣海強;化敏
• 申請（專利權）人: 山東大學第二醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

本發明涉及一種甘草抗氧化活性成分的快速定量篩選方法及其應用，屬于中藥質量評價和控制技術領域。針對現階段甘草藥效的質量控制存在的問題，利用其抗氧化活性，建立了其活性成分的快速篩選及各成分抗氧化活性的快速定量測定方法，該方法分析化學成分的同時，同時可快速篩查中藥甘草中的抗氧化活性成分、并對各成分的抗氧化活性做出量化評價，研究優化了甘草的質量評價方法，實現了質量評價與藥效關聯，可更真實的反應飲片質量，研究也可為甘草抗氧化物質基礎的研究提供一定的數據支持。

技術領域

本發明涉及一種甘草抗氧化活性成分的快速定量篩選方法及其應用，屬于中藥質量評價和控制技術領域。

背景技術

甘草為豆科植物甘草Glycyrrhizauralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhizainflata Bat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根和根莖，主要分布于東北、華北、甘肅、新疆等地。甘草具有補脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調和諸藥之功效，臨床常用于脾胃虛弱，倦怠乏力，心悸氣短，咳嗽痰多，脘腹、四肢攣急疼痛等癥，同時可緩解藥物毒性和烈性。現代藥理學研究表明，甘草具有較強的抗氧化活性，其作為一種天然的抗氧化劑目前已在多個領域得到廣泛應用。且其抗炎、殺菌、抗衰老等多種藥理活性均與其抗氧化性活性密切相關。現已報道的甘草中抗氧化活性成分包括黃酮、多糖和三萜等多類化合物。

目前對于甘草化學成分分析包括GC-MS、HPLC含量測定、HPLC指紋圖譜和HPLC-MS技術等等，可以得到越來越豐富的成分信息，但是由于甘草藥效物質基礎尚不明確，其質量控制的指標成分往往與藥效并無關聯，因此指標成分含量高低并不能真正代表其質量優劣。

發明內容

本發明針對現階段甘草質量評價方法和評價指標與藥效缺乏相關性的問題，利用其抗氧化活性，建立了活性成分的快速篩選方法，該方法分析化學成分的同時，同時可快速篩查甘草飲片中的抗氧化活性成分、并對各成分的抗氧化活性做出量化評價，研究優化了甘草的質量評價方法，實現了質量評價與藥效關聯，可更真實的反應飲片質量，研究也可為甘草抗氧化物質基礎的研究提供一定的數據支持。

一種甘草抗氧化活性成分的快速定量篩選方法，包括以下步驟：

（1）供試品溶液的制備：將干燥的甘草飲片粉碎，過60目篩，加入甲醇，甘草與甲醇的比例為1g：20mL，超聲處理，濾液過0.45 μm微孔濾膜；

（2）Vc對照品溶液的制備：取 L（+）-抗壞血酸標準品，配置儲備液，置4℃冰箱保存，備用；

（3）HPLC-UV-DPPH在線系統：

HPLC系統色譜條件：4.6×250 mm，5μm的 XDB-C₁₈色譜柱，柱溫30 ℃；流動相乙腈（A）-0.2 %甲酸水溶液（B）梯度洗脫，檢測器波長為254 nm；

柱后自由基分析系統色譜條件：流動相為DPPH-甲醇溶液，檢測波長517 nm，柱后溫度30 ℃；

（4）質譜條件：流動相采用三通分流；電噴霧正離子模式；全掃描范圍m/z 100～1000；毛細管電壓4000 V；通入干燥氣體，溫度350 ℃；裂解電壓300 V；錐孔電壓65 V，霧化氣壓力30 psi；

（5）得到甘草特征圖譜，得到甘草抗氧化活性成分及各活性成分的抗氧化活性。

所述的步驟（4）中梯度洗脫的條件為：0～10 min，15 %～25 %A；10～20.3 min，25%～30 %A；20.3～70 min，30%～70 %A；70～75 min，70%～15 %A。

所述的步驟（3）中儲備液的濃度為0.05mg·mL^-1。

上述快速定量篩選方法用于甘草飲片質量的控制和評價。