[發明專利]基于多重PCR-飛行時間質譜檢測34種呼吸道病原微生物的引物和探針組合及試劑盒

在審

• 申請號: 202010573535.3
• 申請日: 2020-06-22
• 公開（公告）號: CN111876524A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 王冬;郭金海;王春香
• 申請（專利權）人: 江蘇康為世紀生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/6872;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/35;C12R1/01
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

本發明提供了基于多重PCR飛行時間質譜的多重呼吸道病原體核酸檢測及鑒定新冠病毒分型的引物和探針組合，所述的引物和探針組合包括，1）引物序列組合，如表1所示；2）探針序列組合，如表2所示。本發明還提供了基于多重PCR飛行時間質譜的多重呼吸道病原體核酸檢測及鑒定新冠病毒分型的試劑盒。本發明中，基于MassARRAY MALDI?TOF MS系統，除了對多種呼吸道病原體可以同時進行檢測，還可以對2019新型冠狀病毒（2019?nCoV）進行分型鑒定，這樣對臨床和病毒研究更加有意義。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種利用多重PCR-飛行時間質譜檢測34種呼吸道病原微生物的方法、配套引物/探針組合及試劑盒、以及這種檢測方法在呼吸道病毒感染上的應用。

背景技術

呼吸道感染疾病，尤其是急性呼吸道傳染病，一直是全球致死、致殘的重要病因，在世界范圍內受到廣泛關注。病毒是造成呼吸道感染疾病最主要的原因，50％以上的呼吸道感染是由病毒引起。常見的呼吸道感染病毒包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞體病毒、冠狀病毒等。甲型流感病毒可以感染人和哺乳動物以及禽類，H1N1、H2N2、H3N2 亞型主要感染人類，其它亞型主要是感染禽類以及豬、馬和水生哺乳動物；在禽流感病毒中能夠感染人類的亞型有H5N1、H7N1、H7N2、H7N4、H7N9、 H9N2、H10N8等12種。乙型流感病毒主要在人群中流行，沒有亞型分類，其流行規模比甲型流感病毒要小。呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，RSV)是副粘病毒科肺病毒屬中單鏈RNA病毒，分為A、B兩型，是 5歲以下嬰幼兒呼吸道感染的最主要病因，我國2歲以下住院和門/急診病例中，RSV檢出率高居榜首，達33.3％[參見Yu J，et al.Comparison of the prevalence ofrespiratoryviruses in patients with acute respiratory infections at differenthospitalsettings in North China，2012-2015.BMC Infect Dis.2018Feb 8；18(1)：72]；此外，RSV還能感染其他各個年齡組的人群，并導致嚴重的呼吸道疾病，其病情在老年人中尤為嚴重。副流感病毒(PIV)屬于副粘病毒科(paramyxiviridae)，副粘病毒亞科(paranyxivirinae)，可引起各年齡階段人群發病，尤其以嬰幼兒易感，其致病性僅次于呼吸道合胞病毒。腺病毒 (Adenoviruses，ADV)是腺病毒科哺乳動物腺病毒屬(Mastadenovirus)的一種，可感染呼吸道、胃腸道、尿道、膀胱、眼和肝臟等，并引起廣泛的臨床癥狀。人偏肺病毒(Human metapneumovirus，hMPV)是五歲以下嬰幼兒急性呼吸道感染的重要病原體，通?？膳cRSV、流感病毒等共感染，導致兒童的臨床癥狀加重。人博卡病毒(Bocavirus)是細小病毒科細小病毒亞科的一個屬，通常感染腸道和呼吸道，由瑞典科學家運用分子病毒篩查方法于2005年首次在兒童呼吸道分泌物中發現；作為與人類急性呼吸道感染密切相關的新型病毒，人博卡病毒與其他呼吸道病毒的共感染率可高達51％，通過空氣傳播，容易使嬰幼兒罹患肺炎、支氣管炎和支氣管肺炎等疾病。人腸病毒(HEV) 是一種主要寄生于腸道的正鏈單股RNA病毒，具高傳染性，主要經由吃到被污染的食物、水等或經由呼吸道(飛沫、咳嗽等)傳染；大部分的HEV感染臨床癥狀都是輕微的類流感癥狀，表現為發燒、喉痛、頭痛、惡心等。人鼻病毒(Human rhinovirus，HRV)是小RNA病毒科、鼻病毒屬的一種，是人患普通感冒的主要病原，感染人群主要為老年人和5歲以下兒童，尤其多發于1歲以下兒童。柯薩奇病毒(Coxsackievirus)是一種腸病毒(enterovirus)，分為A和B兩類，是一類常見的經呼吸道和消化道感染人體的病毒，感染后人會出現發熱、打噴嚏、咳嗽等感冒癥狀。肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae，MP)是介于細菌與病毒之間，無細胞壁的一類原核細胞型生物，是引起兒童氣管炎、支氣管炎、原發性不典型肺炎的重要病原體。