[發明專利]一種野山杏果肉黃酮類化合物的測定方法

在審

• 申請號: 202010568206.X
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111665306A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 戴小華;彭斌;金科旭;束佳敏;王天琪;海婷玉
• 申請（專利權）人: 新疆農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 程華

本發明公開了一種野山杏果肉黃酮類化合物的測定方法，建立同時分析測定新疆野山杏果肉中4種黃酮類化合物的高效液相色譜分析方法。采用Hubble C18色譜柱，流動相甲醇:0.5％磷酸水溶液＝45:55，在1.0ml/min流速下等度洗脫，分離新疆野山杏果肉中4種黃酮類化合物，通過儀器精密度、穩定性、重復性及添加回收率對該方法進行驗證。蘆丁、槲皮素、原花青素3種黃酮成分色譜峰在20min內分離度良好，線性范圍為0.52～56μg/mL，加樣回收率為92.13％～96.70％，RSD為0.89％～1.96％。該方法簡便、快速、準確、穩定性及重復性好，適合推廣應用。

技術領域

本發明屬于分析化學技術領域，具體地說，涉及一種野山杏果肉黃酮類化合物的測定方法。

背景技術

野山杏〔Armeniaca sibirica(L.)Lam.〕果肉中含有多種黃酮類化合物，黃酮類化合物具有多種生物活性及藥理作用，也是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價值。近年來國內外學者對黃酮及黃酮類化合物的不同分析檢測方法進行了探究，其高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)具有靈敏度高、流動相和色譜柱選擇范圍廣、分析速度快、流出組分易收集等特點，故選擇該方法進行成分分析較普遍。如張元梅等研究利用高效液相法同時檢測柑橘果實中18種黃酮類化合物的含量，具有良好的分離效果；左月明等等采用RP-HPLC法在40min內梯度洗脫同時檢測出三白草藥材中蘆丁、槲皮素等黃酮類化合物的含量；WANG等在流速1.0ml/min下梯度洗脫25min內同時分離檢測冷蒿地上部分7種黃酮類化合物含量。關于野山杏黃酮及黃酮化合物的提取及分離方面報道較少，故本發明擬通過高效液相色譜法建立一種簡便、快速、準確的測定方法。

發明內容

本發明的目的在于提出了一種野山杏果肉黃酮類化合物的測定方法，該方法采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法，通過考察檢測波長、流動相、流速、柱溫等因素確定色譜條件，通過系統適用性試驗、精密度實驗、穩定性實驗、重復性實驗、加樣回收率實驗等對野山杏果肉中4種黃酮類化合物的含量分析方法進行驗證。本發明為進一步探討新疆野山杏總黃酮的提取分離奠定實驗基礎，為開發利用新疆特色藥食同源植物提供理論依據。

其技術方案如下：

一種野山杏果肉黃酮類化合物的測定方法，包括以下步驟：

步驟1、溶液的制備

1.1)對照品溶液的配制

稱取原花青素、蘆丁、柚皮苷二氫查爾酮、槲皮素4種對照品各10.00±0.20mg，用甲醇溶解并分別定容至25mL容量瓶中，搖勻，即得對照品溶液。

1.2)混標儲備液

分別取上述步驟1.1)中溶液各2.50mL，混合均勻，制得含有原花青素106.00ug/ml、蘆丁103.00ug/ml、柚皮苷二氫查爾酮112.00ug/mL、槲皮素104.00ug/ml的混標儲備液。

1.3)混標中間液

準確量取5mL混標溶液甲醇定容至10mL，制得含有原花青素53.00ug/ml、蘆丁51.50ug/ml、柚皮苷二氫查爾酮56.00ug/mL、槲皮素52.00ug/ml混標中間液。

1.4)混標標準工作液

分別取0.25、0.50、1.00、2.00mL中間液甲醇定容至10ml容量瓶，搖勻，配制標準工作液上機待測。

1.5)供試品溶液的配制

取1g野山杏干燥果肉，粉碎，過40目篩，加50％乙醇(料液比1:50)，70℃下超聲1h，超聲提取2次，抽濾，合并濾液旋蒸濃縮后，用甲醇定容至10mL，搖勻，制成供試品溶液，測定前用微孔濾膜(0.22μm)過濾，備用。