[發明專利]檢測血清外泌體RNF144A-AS1的引物、試劑盒及其在胃癌肝轉移診療中的應用

在審

• 申請號: 202010564677.3
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111926076A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 范鈺;何蓉;郎亞昆;滿昌峰;周永靜;龔丹丹
• 申請（專利權）人: 鎮江市第一人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 王玉

本發明涉及檢測血清外泌體RNF144A?AS1的引物、試劑盒及其在胃癌肝轉移診療中的應用，試劑盒包括血清lncRNA樣本的RNA提取試劑、引物、去基因組DNA反應體系、逆轉錄反應體系、qPCR操作反應體系，本發明公開了lncRNA在胃癌患者及正常人血清外泌體中的表達情況，并用熒光定量PCR檢測RNF144A?AS1。血清外泌體RNF144A?AS1可用于胃癌肝轉移早期診斷，判斷疾病進展和預后情況，并可評價胃癌肝轉移的治療效果。

技術領域

本發明涉及檢測血清外泌體RNF144A-AS1的引物、試劑盒及其在胃癌肝 轉移診療中的應用，屬于分子診斷技術領域。

背景技術

胃癌易發生肝轉移,與肝臟的生物學特點密不可分。肝臟是人體最大的腺器, 受肝門靜脈和肝動脈雙重血液供應,其中,肝門靜脈占80％,肝動脈占20％,消 化道器官的血液均經肝門靜脈回流,肝臟具有豐富的血流量。肝毛細血管是多孔 的血竇狀結構,具有很強的通透性,且肝竇導管缺乏皮下基底膜,與腦、肺和骨等 其他器官相比,腫瘤細胞更加容易在肝臟發生外滲,所以肝臟是消化道腫瘤轉 移最主要的器官。

胃癌、結直腸癌及胰腺癌等均會通過血管轉移和淋巴回流等 途徑首先轉移到肝臟。肝臟豐富的血管系統為腫瘤細胞的生長提供了充足的營 養物質。除了血液循環系統的作用,胃癌細胞也容易與肝竇內皮細胞黏附。肝毛 細血管可使大量的腫瘤細胞阻滯,腫瘤細胞與血管內皮細胞相互作用后,分泌細 胞因子使血管內皮細胞收縮,促進腫瘤細胞侵出血管,以利于腫瘤細胞定植到肝 實質組織中。

目前對胃癌肝轉移早期診斷仍是一大難題。已有一些腫瘤分子標志物應用 于臨床早期檢測和輔助診斷,如癌胚抗原CEA、CA199、CA125、AFP等,但特 異性仍較低。有報道稱CD44v6、OPN、YB-1、MAGE-A10等分子可能作為胃癌 肝轉移潛在標志物,但仍待進一步驗證。因此，發現新的調控胃癌細胞肝轉移的 腫瘤相關基因，不但有助于深入了解胃癌肝轉移發生發展的分子機制，補充和 完善現有的細胞癌變理論體系，而且有助于鑒定新的胃癌肝轉移特異的生物標 志物和藥物靶點，為胃癌肝轉移的預防、診斷、治療提供重要的理論依據。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的缺陷，提供一種檢測血清外 泌體RNF144A-AS1的引物、試劑盒及其應用，血清外泌體中的RNF144A-AS1 可用于胃癌肝轉移早期診斷，判斷疾病進展和預后情況，并可評價胃癌肝轉移 的治療效果。

為解決上述技術問題，本發明提供一種檢測血清外泌體RNF144A-AS1的引 物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

本發明還提供一種檢測血清外泌體RNF144A-AS1的試劑盒，包括上述的引 物。

進一步地，還包括血清外泌體的RNA提取試劑、逆轉錄反應體系、qPCR 反應體系。

進一步地，還包括去基因組DNA反應體系。

進一步地，去基因組DNA反應的條件為42℃2min、4℃∞；逆轉錄反應條 件為37℃15min、85℃5s、4℃∞；qPCR反應條件為階段1：95℃、30S、1次循 環；階段2：95℃、5S、40次循環；60℃、31S、40次循環；階段3：95℃、15S、 1次循環；60℃、60S、1次循環；95℃、15S、1次循環。

本發明還提供上述的引物或試劑盒作為胃癌肝轉移診療試劑的應用。

進一步地，使用上述的引物或試劑盒檢測血清外泌體中的RNF144A-AS1。

進一步地，檢測血清外泌體中的RNF144A-AS1的方法，包括：

提取待檢血清中外泌體；

從外泌體樣本中提取RNA；

從提取的RNA中去除基因組DNA；