[發(fā)明專利]用于檢測食管癌的組合物及其試劑盒和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010561475.3
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN113528657B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵琦
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州達健生物科技有限公司;安徽達健醫(yī)學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州獨角熊知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 44580
• 代理人: 張小黎

1.用于食管癌基因甲基化檢測區(qū)域，其特征在于，包括以下1)或2)所示的基因甲基化檢測區(qū)域：

1)基因ZNF154甲基化檢測區(qū)域，所述區(qū)域為核酸序列

GGGATCTATGAAAACTACATTACCTAGAATGCTCTGCGTTGAACGCCACGCTACTAAGCCAGTAAGAGCTCAGAAAACCGACTTTCCTTGAGAGTCACAAAAAGAAAGGACGGG或

TGGGATAGGGACCGCTGTCCCCGGGTCCCTACCAATGTCGCCCGTCGCTCCCGGCCCAGCTCTACCCGCAGAGTCTGATGGCAGCGGCC經(jīng)亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化后所得的甲基化檢測區(qū)域；

2)基因ZNF154甲基化檢測區(qū)域，所述區(qū)域為核酸序列

GGGATCTATGAAAACTACATTACCTAGAATGCTCTGCGTTGAACGCCACGCTACTAAGCCAGTAAGAGCTCAGAAAACCGACTTTCCTTGAGAGTCACAAAAAGAAAGGACGGG或

TGGGATAGGGACCGCTGTCCCCGGGTCCCTACCAATGTCGCCCGTCGCTCCCGGCCCAGCTCTACCCGCAGAGTCTGATGGCAGCGGCC經(jīng)亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化后所得的甲基化檢測區(qū)域；以及，基因PLCD1甲基化檢測區(qū)域，所述區(qū)域為核酸序列為

GGAGCCTTAAGGTGGCGGCGCTCAATGGACGGAGGCTGGGTAAGGGGCGCAGAGCACTCCGAGATCTGCGGGG或

AGGGAGCTCTACCTGCAGGAGCGGAGCCTTAAGGTGGCGGCGCTCAATGGACGGAGGCTGGGTAAGGGGCGCAGAGCACTCCGAGATCTGCGGGGGAATGGGAAGGCAGCTGGAGCAGGACGCCGAC經(jīng)亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化后所得的甲基化檢測區(qū)域。

2.用于食管癌基因甲基化檢測的PCR引物探針組合，其特征在于，包括以下1)或2)所示的核酸序列組合：

1)ZNF154甲基化檢測的PCR引物及探針，包括引物探針組合4、引物探針組合6中的一種，其中所述引物探針組合4包括如SEQ ID NO.10所示的上游引物、如SEQ ID NO.11所示的下游引物以及如SEQ ID NO.12所示的熒光探針，所述引物探針組合6包括如SEQ ID NO.16所示的上游引物、如SEQ ID NO.17所示的下游引物以及如SEQ ID NO.18所示的熒光探針；

2)ZNF154甲基化檢測的PCR引物及探針，包括引物探針組合4、引物探針組合6中的一種，其中所述引物探針組合4包括如SEQ ID NO.10所示的上游引物、如SEQ ID NO.11所示的下游引物以及如SEQ ID NO.12所示的熒光探針，所述引物探針組合6包括如SEQ ID NO.16所示的上游引物、如SEQ ID NO.17所示的下游引物以及如SEQ ID NO.18所示的熒光探針；

以及，PLCD1甲基化檢測的PCR引物及探針，包括引物探針組合1、引物探針組合2中的一種，其中所述引物探針組合1包括如SEQ ID NO.1所示的上游引物、如SEQ ID NO.2所示的下游引物以及如SEQ ID NO.3所示的熒光探針，所述引物探針組合2包括如SEQ ID NO.4所示的上游引物、如SEQ ID NO.5所示的下游引物以及如SEQ ID NO.6所示的熒光探針。

3.如權(quán)利要求2所述的用于食管癌基因甲基化檢測的PCR引物探針組合，其特征在于，還包括檢測內(nèi)參基因GAPDH的PCR引物及探針，其中，所述引物包括如SEQ ID NO.19所示的上游引物、如SEQ ID NO.20所示的下游引物，所述探針包括如SEQ ID NO.21所示的熒光探針。

4.如權(quán)利要求2或權(quán)利要求3所述的用于食管癌基因甲基化檢測的PCR引物探針組合，其特征在于，所述熒光探針的5’端包含有熒光報告基團，所述熒光報告基團包括FAM、HEX、NED、ROX、TET、JOE、TAMRA、CY3、CY5中的任意一種。