[發(fā)明專利]一種長時間常溫保存病毒樣本的保存液及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010559144.6
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111518775B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃服喜;劉松;李基君;陳香
• 申請（專利權(quán)）人: 合肥錸科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12Q1/70;C12Q1/6806;C12R1/93
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 陳歡

本發(fā)明提供一種長時間常溫保存病毒樣本的保存液，配置有病毒生存所需的鹽類、氨基酸、葡萄糖等營養(yǎng)物質(zhì)，同時為保護(hù)病毒，添加了聚乙烯吡咯烷酮、甘露醇、海藻糖等病毒保護(hù)劑，為抑制菌類生長，添加了兩性霉素B、萬古霉素等抑菌劑。該保存液安全無毒，使用簡單，無須冷鏈保存，可常溫運(yùn)輸保存病毒樣本長達(dá)3天，有效解決病毒樣本采樣、運(yùn)輸以及保存過程中依賴?yán)滏溓冶４鏁r間較短等問題。該保存液能保持病毒樣本的原始性，利于對病毒樣本的全面分析研究，適用于流行病毒樣本采集與運(yùn)輸。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種長時間常溫保存病毒樣本的保存液及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

病毒是一種沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的特殊生物，由蛋白質(zhì)外殼和內(nèi)部的遺傳物質(zhì)組成。病毒個體微小，結(jié)構(gòu)簡單，只含一種遺傳物質(zhì)(DNA或RNA)。病毒沒有代謝機(jī)構(gòu)，沒有酶系統(tǒng)，不能獨(dú)立生存，只能寄生在宿主細(xì)胞內(nèi)，依賴宿主細(xì)胞中的物質(zhì)和能量完成生命活動，根據(jù)其包含的遺傳信息進(jìn)行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、和轉(zhuǎn)譯，產(chǎn)生新一代病毒，實(shí)現(xiàn)復(fù)制式增殖。復(fù)制增殖后的新一代病毒可裂解原宿主細(xì)胞，感染新的宿主細(xì)胞進(jìn)行下一輪復(fù)制式增殖。病毒性感染的潛在危害極大，例如新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)，該病毒是一種先前未在人類中發(fā)現(xiàn)的新型冠狀病毒，可導(dǎo)致急性感染性肺炎(COVID-19)，感染者初始癥狀多為發(fā)熱、乏力和干咳，后續(xù)逐漸出現(xiàn)呼吸困難，嚴(yán)重者可出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征或膿毒癥休克，甚至死亡。

為了全面分析病毒性感染發(fā)生的原因，往往需要將病毒從病患中分離出來并通過分析鑒定，以確定病毒感染類型。活體病毒可以最大程度保持樣本的原始性，既可用于病毒的培養(yǎng)和分離，也可用于對病毒的各種分子生物檢測。目前用來作為病毒運(yùn)送保存液主要為Hanks液。但受運(yùn)輸、冷鏈、保存等因素影響，Hanks液的保存時間較短，病毒形態(tài)的完整性易受影響，不利于病毒的分離鑒定，也不利于病毒提取率，且易滋生細(xì)菌、真菌，導(dǎo)致Hanks液pH值下降，當(dāng)Hanks液pH值小于7.4時，病毒穩(wěn)定性下降，病毒的分解速度加快，難以長時間保存病毒活性。現(xiàn)有的病毒樣本采集和保存處理方法依賴?yán)滏溸\(yùn)輸，同時基于病毒活性的考慮，保存時間多為48小時內(nèi)，不僅增加了樣本運(yùn)輸和保存的成本，更限制了樣本采集點(diǎn)和診斷實(shí)驗(yàn)之間的可能和距離，直接影響實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

因此有必要開發(fā)一種無須冷鏈、在常溫下長時間穩(wěn)定保存病毒活性的病毒樣本保存液。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種長時間常溫保存病毒樣本的保存液及其應(yīng)用，該保存液無須冷鏈，可常溫穩(wěn)定保存病毒樣本長達(dá)3天，能保持病毒樣本的原始性，利于對病毒樣本的全面分析研究，適用于流行病毒樣本采集。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明第一方面提供一種長時間常溫保存病毒樣本的保存液，包括葡萄糖、谷氨酸鈉、檸檬酸氫銨、氯化鈉、氯化鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、乙二胺四乙酸、病毒保護(hù)劑、抑菌劑。

在本發(fā)明一實(shí)施例中，所述長時間常溫保存病毒樣本的保存液包括葡萄糖0.5-1.5mg/mL、谷氨酸鈉0.01-0.05mg/mL、檸檬酸氫銨2-5mg/mL、氯化鈉5-10mg/mL、氯化鉀0.1-0.5mg/mL、磷酸二氫鉀0.02-0.1mg/mL、磷酸氫二鈉0.01-0.1mg/mL、乙二胺四乙酸1-5mg/mL、病毒保護(hù)劑2-6％、抑菌劑1-3％。

在本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中，所述病毒保護(hù)劑包括聚乙烯吡咯烷酮、甘露醇、海藻糖中的一種或多種。

進(jìn)一步地，所述病毒保護(hù)劑包括聚乙烯吡咯烷酮、甘露醇、海藻糖，所述聚乙烯吡咯烷酮濃度為0.5-1.5％，所述甘露醇濃度為0.5-1.5％，所述海藻糖濃度為1-3％。

在本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中，所述抑菌劑包括真菌抑菌劑與細(xì)菌抑菌劑，所述真菌抑菌劑包括兩性霉素B、制霉菌素、灰黃霉素中的一種或多種，所述細(xì)菌抑菌劑包括萬古霉素、慶大霉素、粘菌素中的一種或多種。

進(jìn)一步地，所述抑菌劑包括兩性霉素B、萬古霉素，所述兩性霉素B濃度為0.25-0.75％，所述萬古霉素為0.75-2.25％。