[發明專利]一種細管凍精生產中精液手動罐裝的方法

有效

• 申請號: 202010556987.0
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111619839B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 曹祖兵;任尚;楊賢樹;張翔棟;汝振遠;張運海
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 合肥云道爾知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 34230
• 代理人: 閆興貴

1.一種細管凍精生產中精液手動罐裝的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、精液預稀釋：取BTS標準液，并添加慶大霉素300mg/L，配置成精液預稀釋液，將取回來的鮮精液與精液預稀釋液，按照體積比1：（0.5～2）進行預稀釋，然后將稀釋后的精液放置于23℃的環境中平衡0.5～2h，待稀釋的精液溫度穩定后，再放置于17℃的恒溫箱中放置2～3h，直至稀釋后的精液溫度穩定至17℃，從而完成鮮精液的預稀釋，制得鮮精稀釋液；

S2、精液凍存基礎液的配置：取葡萄糖、檸檬酸、Tris若干量，加水定容至100mL，并添加少量卡那霉素，放置于磁力攪拌器上充分混勻，制得精液凍存基礎液；

S3、精液凍存Ⅰ液的配置：取新鮮的去除蛋清的雞蛋黃若干，用濾紙擦干雞蛋黃表面蛋清，再用濾紙折疊包裹雞蛋黃，并用力致雞蛋黃膜破裂，使雞蛋黃流出到事先準備好的量筒中，將雞蛋黃與S2步驟制得的精液凍存基礎液，按照體積比1：（2～4）混合，并放置于磁力攪拌器上攪拌20～40min，最后置于17℃的恒溫箱中，待混合液溫度穩定后，即制得精液凍存Ⅰ液；

S4、精液凍存Ⅱ液的配置：取精液凍存Ⅰ液定量，并添加甘油、磷酸酯滲透劑適量，放置于磁力攪拌器上攪拌混勻后，再放置于4℃的冰箱中降溫至4℃備用，從而制得精液凍存Ⅱ液；

S5、鮮精灌裝液的配置：取S1步驟制得的鮮精稀釋液適量，放入大容量離心機中，于800g條件下離心10～20min，然后去除上清液，再根據計算公式添加適量精液凍存Ⅰ液充分混勻后移入集精瓶中，并放入4℃的冰箱中水浴降溫2～4h；最后從冰箱中取出，并等體積加入精液凍存Ⅱ液，輕輕搖勻，放入4℃的冰箱中備用，即制得鮮精灌裝液；所述計算公式為：V=（V₁*φ*ρ*Λ）/2，其中，V為加入的精液凍存Ⅰ液的體積；V₁為離心前的鮮精稀釋液的體積，單位為mL；φ為鮮精稀釋液中的鮮精液的體積百分比濃度；ρ為鮮精液的密度，單位為億/mL；Λ為鮮精液的活力；

S6、手動灌裝：將S5步驟制得的鮮精灌裝液，從冰箱中取出，利用灌裝器吸滿鮮精灌裝液，并將灌裝器前端插入麥管無棉花端，然后輕推灌裝器，使灌裝器內的鮮精灌裝液緩慢進入麥管內，直至灌裝器內的鮮精灌裝液與麥管前端的棉花相接觸，而灌裝器受到阻力為止停止灌裝；所述灌裝器，包括注射器、點膠針頭、硅膠墊片，所述硅膠墊片于點膠針頭上部穿刺而過，并與注射器組裝在一起，所述灌裝器，包括注射筒（1）、活塞組件（2）、注射針頭組件（3），所述注射筒（1）前端設置有喇叭形口頸（11），所述喇叭形口頸（11）前端設置有圓管形連接端（12）；所述活塞組件（2），包括活塞柄（21）、活塞桿（22）、活塞片（23），所述活塞柄（21）、活塞片（23）分別設置在活塞桿（22）的兩端，所述活塞片（23）的前端設置有與喇叭形口頸（11）相適配的喇叭形堵塞（24），所述喇叭形堵塞（24）前端設置有圓柱形堵塞（25），所述活塞片（23）、喇叭形堵塞（24）、圓柱形堵塞（25）設置在注射筒（1）內；所述注射針頭組件（3），包括針栓（31）、針梗（32），所述針栓（31）安裝在圓管形連接端（12）上，所述針梗（32）外壁上設置有環形硅膠片（4），所述環形硅膠片（4）上設置有環形槽（41），所述針梗（32）前端設置有錐形臺狀針尖（33），所述錐形臺狀針尖（33）頂端設置連通針梗（32）和針栓（31）的內通孔（331），所述錐形臺狀針尖（33）外壁上設置有多個連通內通孔（331）的旁通孔（332），所述針栓（31）一端設置有外凸的環形限位片（34）；

S7、精液冷凍：將S6步驟中灌裝好鮮精灌裝液的麥管的非棉花端進行封口，并將封好口的麥管放入程序冷凍儀中進行冷凍，從而完成細管凍精生產中精液手動罐裝的整個過程。

2. 根據權利要求 1 所述的一種細管凍精生產中精液手動罐裝的方法，其特征在于，在S1步驟中，所述BTS標準液的組分包括：葡萄糖37g/L，EDTA 1.25g/L，檸檬酸鈉6g/L，碳酸氫鈉1.25 g/L，氯化鉀0.75 g/L，余量為水。

3.根據權利要求 1 所述的一種細管凍精生產中精液手動罐裝的方法，其特征在于，在S2步驟中，以加水定容制備100mL精液凍存基礎液計算，所述精液凍存基礎液的原料包括：葡萄糖1.1g、檸檬酸1.48 g、Tris2.42g、卡那霉素微量。