[發明專利]一種用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202010552691.1
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN113009138B
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 韓琳;王春華;張宇;劉宏
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574;B01L3/00
• 代理公司: 青島華慧澤專利代理事務所(普通合伙) 37247
• 代理人: 劉娜

1.一種非診斷目的的用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的方法，采用一種用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的試劑盒，其特征在于，試劑盒包括微流控芯片、純化的重組蛋白CA153、CA125、CEA、AFP和CA199，生物素標記的CA153單克隆檢測抗體、CA125單克隆檢測抗體、CEA單克隆檢測抗體、AFP單克隆檢測抗體和CA199單克隆檢測抗體；APC-霉鏈親和素偶聯物、封閉液、工作液和抗體稀釋液；

所述微流控芯片包括反應層襯底和位于其上的微流道加樣層，所述反應層襯底包括載玻片基板和組裝于載玻片基板上的氧化石墨烯量子點納米材料基底，所述氧化石墨烯量子點納米材料基底上印刷有CA153單克隆捕獲抗體條形碼、CA125單克隆捕獲抗體條形碼、CEA單克隆捕獲抗體條形碼、AFP單克隆捕獲抗體條形碼和CA199單克隆捕獲抗體條形碼；

所述微流道加樣層的底部設有多個微流道凹槽，多個所述微流道凹槽與多個所述單克隆捕獲抗體條形碼垂直布置形成多個反應點陣，所述微流道加樣層上還設有上下貫通的流入孔和流出孔，所述微流道凹槽的兩端分別與所述流入孔和流出孔連通；

檢測方法包括如下步驟：

（1）將微流道加樣層與印刷有CA153單克隆捕獲抗體條形碼、CA125單克隆捕獲抗體條形碼、CEA單克隆捕獲抗體條形碼、AFP單克隆捕獲抗體條形碼和CA199單克隆捕獲抗體條形碼的反應層襯底依靠自重貼合，形成封閉的反應腔室；

（2）從多個流入孔分別注入不同的待測樣本，孵育10-40 min，使待測樣本中的腫瘤標志物充分與反應層襯底上的單克隆捕獲抗體結合，孵育完成之后，從流出孔將多余的待測樣本抽干；

（3）在含BSA質量濃度為0.5-5%的DPBS中揭片，并且用質量濃度為0.5-5%的BSA將沒有吸附在反應層襯底上的腫瘤標志物沖洗干凈；

（4）取混合檢測抗體溶液滿鋪在反應層襯底上，用封口膜貼合在反應層襯底上，孵育10-40 min；

（5）揭下封口膜，用質量濃度為0.5-5%的BSA沖洗，然后取APC-鏈霉親和素偶聯物滿鋪在反應層襯底上，此時，APC-鏈霉親和素偶聯物與帶有生物素標記的腫瘤標志物檢測抗體特異性結合固定在反應層襯底上，然后對腫瘤標志物進行熒光檢測。

2.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的方法，其特征在于，所述封閉液是用磷酸鹽緩沖液DPBS作為溶劑配制的質量濃度為1-6%的牛血清蛋白溶液。

3.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的方法，其特征在于，所述工作液是用DPBS溶液和用磷酸鹽緩沖液DPBS作為溶劑配制的質量濃度為0.5-5%的牛血清蛋白溶液。

4.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的方法，其特征在于，所述抗體稀釋液是用磷酸鹽緩沖液DPBS作為溶劑配制的質量濃度為0.5-5%的牛血清蛋白溶液。

5.根據權利要求4所述的一種非診斷目的的用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的方法，其特征在于，所述DPBS溶液，pH為7.2-7.4，濃度為0.01-0.1mol/L。

6.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的方法，其特征在于，所述單克隆檢測抗體濃度大于100ug/ml，所述單克隆檢測抗體的工作濃度稀釋倍數為 1:100-1:500。

7.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的用于乳腺癌腫瘤標志物檢測的方法，其特征在于，所述APC-霉鏈親和素偶聯物濃度大于100ug/ml，所述的APC-霉鏈親和素偶聯物的工作濃度稀釋倍數為1:100-1:500。