[發明專利]KLK13在制備診斷宮頸腺癌檢測試劑盒上的應用

有效

• 申請號: 202010551681.6
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111679073B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 顧蕓;儲誠卓;鐘天鷹;劉妍;徐瑞;朱一超
• 申請（專利權）人: 南京市婦幼保健院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/573
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

本發明公開了KLK13在制備診斷宮頸腺癌檢測試劑盒上的應用，KLK13可作為宮頸腺癌的診斷標志物，通過siRNA干擾HeLa宮頸癌細胞KLK13的表達，MTT細胞增殖試驗和細胞劃痕試驗分別表明宮頸癌細胞的增殖和遷移能力較對照組顯著增加。

技術領域

本發明涉及免疫檢測領域，具體地說涉及KLK13在制備診斷宮頸腺癌檢測試劑盒上的應用。

背景技術

宮頸癌是最常見的女性惡性腫瘤之一，居女性致死癌癥的第4位，其中宮頸鱗狀細胞癌占80%~85%，宮頸腺癌占10%~15%。隨著兩癌篩查的普及，宮頸鱗癌的發病率明顯降低，而宮頸腺癌因病變位置較為隱蔽，現有的篩查方式并未改變其發生率和死亡率。目前，宮頸腺癌早期發現還是存在特異性低、易漏診誤診等特點。而且當前的研究普遍認為，宮頸腺癌比宮頸鱗癌的預后更差。因此，探究宮頸腺癌的診斷標志物有很重要的意義。

現有技術利用宮頸腺癌組織ER、VIM、PR、CEA、Ki-67和p16等蛋白的表達水平進行聯測，具有較高特異性和靈敏性，例如正常情況下子宮內膜樣本中ER的表達水平高達90%以上，但這需要對患者的宮頸組織進行活檢，會造成患者的傷痛。對患者宮頸組織粘液進行檢測是減輕患者傷痛的一種方式，但上述蛋白在宮頸組織粘液中的表達顯著降低，導致檢測靈敏度和特異性不足。

人KLKs（激肽釋放酶相關的肽酶）家族中一共包含15個絲氨酸蛋白酶基因，是具有多種生理功能的絲氨酸蛋白酶亞組。很多證據表明，許多激肽釋放酶與癌發生有關，而且一些激素可能具有新的癌癥和其他疾病生物標志物的潛力。KLK13是位于19號染色體上的15個激肽釋放酶亞家族成員之一，別名為KLKL4，是一段含有10kb的DNA序列，含有5個外顯子和4個內顯子。在近年來的研究表明，在乳腺癌、口腔癌、結直腸癌等多種癌癥中，KLK13存在不同程度的差異表達，提示其與腫瘤的發生發展密切相關。又如，歐洲專利EP1664791A2（優先權日2003-08-30）公開了一種KLK13相關疾病的診斷和治療方法，涉及多種腫瘤疾病的診斷和治療，例如甲狀腺腫瘤、血管瘤等，主要通過基因診斷方法定量測量KLK13的表達水平，但其并未公開KLK13水平與宮頸腺癌的關系。本領域目前也未發現KLK13在宮頸腺癌組織粘液中的表達特異性。

發明內容

發明目的：本發明的目的是提供KLK13在制備非活檢診斷宮頸腺癌檢測試劑盒上的應用，該檢測試劑盒的生物試樣來源于宮頸組織粘液。

技術方案：本發明所述的宮頸腺癌包括原位宮頸腺癌和浸潤性宮頸腺癌。發明人發現KLK13在原位宮頸腺癌患者和浸潤性宮頸腺癌患者宮頸組織粘液的表達相對于健康人群的粘液均形成顯著差異。與浸潤性宮頸腺癌患者相比，KLK13在原位宮頸腺癌患者的粘液中顯著低表達。通過siRNA干擾實驗發現KLK13可顯著抑制宮頸腺癌細胞的增殖速度，但對宮頸癌增殖速度不構成顯著影響；而且KLK13可顯著抑制宮頸腺癌細胞的遷移。

通過制備KLK13的抗體，利用現有的免疫技術制備定性或定量檢測的試劑盒，可用于通過宮頸組織粘液特異性診斷宮頸腺癌。作為一種優選的實施方式，可設計KLK13膠體金法檢測試劑盒，采用兩點夾心固相免疫層析法定性檢測受試者宮頸粘液中的KLK13。在試劑盒的檢測區利用現有技術包被有抗KLK13單克隆或多克隆抗體，質控區包被有抗鼠IgG抗體。通過棉簽刮取的方式獲得宮頸組織粘液進行檢測。

作為本發明的進一步優化，可通過將KLK13和其他標記物進行組合，可進一步提高檢測的靈敏度和特異性。

本發明提供KLK13在制備非活檢診斷宮頸腺癌檢測試劑盒上的應用，對宮頸組織粘液的檢測具有高度敏感度和特異性。這種檢測方式目前未見公開，不會對患者造成創傷，具有很高的應用前景。EP和PR等常規檢測因子在宮頸粘液中未被檢測出，KLK13不僅具有很高的敏感度和特異性，而且可幫助對原位癌和浸潤性癌的診斷。

附圖說明

圖1是本發明實施例1的免疫組化結果圖；