[發明專利]一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法在審
| 申請號： | 202010546697.8 | 申請日： | 2020-06-16 |
| 公開（公告）號： | CN113801221A | 公開（公告）日： | 2021-12-17 |
| 發明（設計）人： | 陳則;張黎明;楊智;柳國艷;范鐵炯;王博;何毅明;王倩倩 | 申請（專利權）人： | 上海賽倫生物技術股份有限公司;中國人民解放軍海軍特色醫學中心 |
| 主分類號： | C07K16/06 | 分類號： | C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18 |
| 代理公司： | 上海市匯業律師事務所 31325 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 201707 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 海蛇 血清 納米 過濾 方法 | ||
1.一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）制備抗海蛇毒血清層析流穿液，包括：獲得血漿；胃蛋白酶消化；硫酸銨第一次沉淀；硫酸銨第二次沉淀；板框壓濾；明礬吸附；板框壓濾；上清液超濾濃縮脫鹽；離子交換柱層析；收集層析流穿液；
（2）控制納米膜過濾的環境溫度為20-28℃，將層析流穿液配制成一定濃度、一定處方的溶液，該溶液組成為8-12mM 磷酸鹽緩沖液，1.5-4.5g/L 甘氨酸，2-10mM 氯化鈉；所述溶液的pH值為6.5-7.5；控制蛋白濃度為20-40g/L；
（3）按照步驟（2）的條件進行納米膜過濾。
2.根據權利要求1所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，步驟（1）中，所述上清液超濾濃縮脫鹽所用超濾溶液為8-12mM 磷酸鹽緩沖液，pH值為 6.5-7.5。
3.根據權利要求1所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，步驟（1）中，所述離子交換柱層析采用的層析平衡液為8-12mM 磷酸鹽緩沖液，pH值為 6.5-7.5。
4.根據權利要求2或3所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，所述上清液超濾濃縮脫鹽所用超濾溶液為9-11mM 磷酸鹽緩沖液，pH值為 6.8-7.2；所述離子交換柱層析采用的層析平衡液為9-11mM 磷酸鹽緩沖液，pH值為 6.8-7.2。
5.根據權利要求1所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，步驟（1）中，所述胃蛋白酶消化的pH值為3.0-4.0。
6.根據權利要求1所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，步驟（1）中，所述硫酸銨第一次沉淀采用的硫酸銨濃度為3~15%；所述硫酸銨第二次沉淀采用的硫酸銨濃度為20~40%。
7.根據權利要求1所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，步驟（1）中，所述明礬吸附采用的明礬濃度為0.2~10%。
8.根據權利要求1所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，步驟（2）中，所述控制納米膜過濾的環境溫度為21-23℃；所述溶液組成為9-11mM 磷酸鹽緩沖液，2-3g/L 甘氨酸，5-8mM 氯化鈉；所述溶液的pH值為6.8-7.2；所述控制蛋白濃度為25-35 g/L。
9.根據權利要求1所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，步驟（3）具體為：經0.1微米預過濾器預過濾后，將樣品加至納米膜過濾的容器中，通過氮氣控制容器壓力3bar，進行納米膜過濾。
10.根據權利要求1或9所述的一種抗海蛇毒血清納米膜過濾方法，其特征在于，所述納米膜過濾采用20nm納米膜過濾9小時。
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