[發(fā)明專(zhuān)利]數(shù)字微流控聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)裝置及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010545709.5
• 申請(qǐng)日: 2020-06-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113801777A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇陽(yáng);馬漢彬;胡思怡
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州國(guó)科醫(yī)工科技發(fā)展（集團(tuán)）有限公司;江蘇液滴邏輯生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12M1/38
• 分類(lèi)號(hào): C12M1/38;C12M1/34;B01L3/00;C12Q1/686
• 代理公司: 深圳市科進(jìn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44316
• 代理人: 魏毅宏

1.一種數(shù)字微流控聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)裝置，其特征在于，包括數(shù)字微流控芯片、溫度控制模塊和熒光檢測(cè)模塊；

所述數(shù)字微流控芯片包括試劑存儲(chǔ)區(qū)、試劑分配區(qū)和反應(yīng)區(qū)域，所述反應(yīng)區(qū)域包括多個(gè)并聯(lián)設(shè)置的反應(yīng)單元；

所述反應(yīng)單元包括依次連接的第一溫區(qū)、過(guò)渡溫區(qū)和第二溫區(qū)，所述第一溫區(qū)、所述過(guò)渡溫區(qū)和所述第二溫區(qū)均包括搬運(yùn)電極，所述試劑存儲(chǔ)區(qū)通過(guò)所述試劑分配區(qū)分別和所述第一溫區(qū)連接，所述反應(yīng)單元還包括進(jìn)樣區(qū)；

所述溫度控制模塊用于分別控制所述第一溫區(qū)和所述第二溫區(qū)的溫度；

所述熒光檢測(cè)模塊用于檢測(cè)所述第一溫區(qū)或所述第二溫區(qū)的熒光信號(hào)強(qiáng)度。

2.如權(quán)利要求1所述的數(shù)字微流控聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)裝置，其特征在于，所述反應(yīng)單元為陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)單元、陰性對(duì)照反應(yīng)單元和待測(cè)試劑檢測(cè)單元。

3.如權(quán)利要求2所述的數(shù)字微流控聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)裝置，其特征在于，所述待測(cè)試劑檢測(cè)單元的數(shù)量為兩個(gè)以上。

4.如權(quán)利要求1所述的數(shù)字微流控聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)裝置，其特征在于，所述多個(gè)反應(yīng)單元之間通過(guò)所述搬運(yùn)電極連接。

5.如權(quán)利要求1所述的數(shù)字微流控聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)裝置，其特征在于，所述多個(gè)所述第一溫區(qū)之間通過(guò)所述搬運(yùn)電極連接。

6.如權(quán)利要求1所述的數(shù)字微流控聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)裝置，其特征在于，所述試劑分配區(qū)包括多個(gè)分配電極，所述試劑存儲(chǔ)區(qū)通過(guò)所述分配電極分別和所述第一溫區(qū)連接。

7.一種數(shù)字微流控聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

S10、將第一試劑和第二試劑進(jìn)行結(jié)合，形成反應(yīng)溶液，其中，所述第一試劑為與引物預(yù)混好的PCR試劑和待檢測(cè)試劑中的一種，所述第二試劑為所述與引物預(yù)混好的PCR試劑和所述待檢測(cè)試劑中的另一種；

S20、將所述反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移至溫度為第一預(yù)設(shè)溫度的第一溫區(qū)內(nèi)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)；

S30、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)完成后，將所述反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移至溫度為第二預(yù)設(shè)溫度的第二溫區(qū)內(nèi)進(jìn)行預(yù)變性反應(yīng)；

S40、檢測(cè)循環(huán)次數(shù)是否達(dá)到預(yù)設(shè)值，若是，結(jié)束循環(huán)反應(yīng)，進(jìn)入S70，若否，則進(jìn)入S50；

S50、將所述反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移至溫度為第二預(yù)設(shè)溫度的第二溫區(qū)內(nèi)進(jìn)行變性反應(yīng)；

S60、調(diào)節(jié)第一溫區(qū)的溫度至第三預(yù)設(shè)溫度，將所述反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移至所述第一溫區(qū)內(nèi)進(jìn)行退火、延伸反應(yīng)，退火、延伸反應(yīng)完成后，返回S40；

S70、檢測(cè)所述第一溫區(qū)或所述第二溫區(qū)的熒光信號(hào)強(qiáng)度，進(jìn)行結(jié)果判定。

8.如權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，S10具體包括以下步驟：

往所述試劑存儲(chǔ)區(qū)加入第一試劑，往多個(gè)所述進(jìn)樣區(qū)分別加入第二試劑；

利用所述試劑分配區(qū)將所述第一試劑分配為多個(gè)液滴，所述搬運(yùn)電極將所述多個(gè)液滴與所述多個(gè)第二試劑進(jìn)行結(jié)合，分別形成反應(yīng)溶液；

采用所述溫度控制模塊將所述第一溫區(qū)升溫至所述第一預(yù)設(shè)溫度，所述搬運(yùn)電極將所述反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移至所述第一溫區(qū)內(nèi)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)；

采用所述溫度控制模塊將所述第二溫區(qū)升溫至所述第二預(yù)設(shè)溫度，當(dāng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)完成后，所述搬運(yùn)電極將所述反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移至所述第二溫區(qū)進(jìn)行預(yù)變性反應(yīng)；

采用所述溫度控制模塊將所述第一溫區(qū)升溫至所述第三預(yù)設(shè)溫度，在所述反應(yīng)溶液完成預(yù)變性反應(yīng)后，所述搬運(yùn)電極控制反應(yīng)溶液在所述第一溫區(qū)和所述第二溫區(qū)之間進(jìn)行循環(huán)往復(fù)運(yùn)動(dòng)，以實(shí)現(xiàn)循環(huán)反應(yīng)；

檢測(cè)循環(huán)次數(shù)是否達(dá)到預(yù)設(shè)值，若是，結(jié)束循環(huán)反應(yīng)，若否，則返回上一步驟；

采用所述熒光檢測(cè)模塊檢測(cè)所述第一溫區(qū)或所述第二溫區(qū)的熒光信號(hào)強(qiáng)度。

9.如權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述待檢測(cè)試劑分別為陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和待檢測(cè)樣本。

10.如權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，采用所述熒光檢測(cè)模塊檢測(cè)所述第一溫區(qū)或所述第二溫區(qū)的熒光信號(hào)強(qiáng)度的步驟中，在所有溫度循環(huán)結(jié)束后執(zhí)行熒光信號(hào)強(qiáng)度的檢測(cè)；或，

每一次溫度循環(huán)后執(zhí)行熒光信號(hào)強(qiáng)度的檢測(cè)。