[發(fā)明專利]DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010539832.6
• 申請(qǐng)日: 2020-06-12
• 公開（公告）號(hào): CN111803511B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋春元;董晨;張晶晶;汪聯(lián)輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京郵電大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/704
• 分類號(hào): A61K31/704;A61K48/00;A61K31/713;A61K47/26;A61P35/00;A61K49/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑，其特征在于，所述試劑包括DNA四面體核酸框架并負(fù)載化療藥物，然后連接MUC1靶向適配體與Mcl-1 siRNA即得，所述化療藥物為DOX， 所述DNA四面體核酸框架是由四條DNA鏈組裝得到，所述四條DNA鏈序列如下：

ssDNA A：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGC(BHQ2)TACCTGCACTGTAAGCACTTTT -3’，

ssDNA B：

5’-AATATATAATTAATTTAATCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTC -3’，

ssDNA C：

5’-Cy5-TAGCTTATCAGACTGGCTTCCCACGTAGTGTCGTTTCTTACAGTGCAGGTAG-Cy3-3’，

ssDNA D：

5’-TCAACATCAGTCTGATAAGCTA(BHQ2)ACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTATTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’；

所述MUC1靶向適配體序列為：5’-TTAAATTAATTATATATTGCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG-3’，所述Mcl-1 siRNA包括一條正義鏈Mcl-1 siRNA sense和一條反義鏈Mcl-1 siRNAantisense，其核酸序列如下：Mcl-1 siRNA sense：5’-GCAGGAUUGUGACUCUCAUdTdT-3’，Mcl-1 siRNA antisense：5’-AUGAGAGUCACAAUCCUGCdTdTAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑，其特征在于，所述DNA四面體核酸框架、MUC1適配體和Mcl-1 siRNA摩爾比例為1:1:2~1:2:4。

3.權(quán)利要求1或2所述的DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）合成DNA四面體核酸框架：將等量的ssDNA A、ssDNA B、ssDNA C、ssDNA D在2×PBS中混勻，90~95℃退火5~10 min，然后將其置于20~40℃的環(huán)境中孵育0.5~1.5 h得到DNA四面體核酸框架；

2）將制備得到的DNA四面體核酸框架與化療藥物混勻，置于20~40℃100-300 rpm的搖床中孵育2-4h，隨后將混合物加入超濾離心管，6000 rpm 10 min離心后，加水再離心兩次；

3）將負(fù)載有化療藥物的DNA四面體核酸框架與等量的MUC1適配體和Mcl-1 siRNA置于2×PBS中20~40℃雜交1-3 h，即獲得DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的所述的DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑的制備方法，其特征在于，所述步驟1）中ssDNA A、ssDNA B、ssDNA C、ssDNA D用量相同。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑的制備方法，其特征在于，所述步驟2）中DNA四面體核酸框架與化療藥物的用量摩爾比為1:100~1:200。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑的制備方法，其特征在于，所述步驟2）的DNA四面體、MUC1適配體和Mcl-1 siRNA摩爾比例為1:1:2~1:2:4。

7.權(quán)利要求1或2所述的一種DNA四面體核酸框架型胃癌診療一體化試劑在制備或篩選治療耐藥性胃癌相關(guān)疾病藥物方面的應(yīng)用。