[發明專利]一種精華液及其制備方法

在審

• 申請號: 202010536486.6
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111514094A
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 季子云;李杰
• 申請（專利權）人: 杭州鳳喆凰生物科技有限公司
• 主分類號: A61K8/99
• 分類號: A61K8/99;A61K8/64;A61K8/67;A61K8/73;A61Q19/08;A61Q19/00;C12N5/0775
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• 代理人: 暫無信息

1.一種精華液，其特征在于，包括以下質量百分比的組分：酵母提取物5-10％，還原型谷胱甘肽0.1-0.2％，殼聚糖0.05-0.1％，透明質酸鈉0.8-1％，維生素C 0.01-0.03％，維生素E 0.01-0.03％，海藻膠原膠質8-10％，余量間充質干細胞培養上清液。

2.根據權利要求1所述精華液的制備方法，其特征在于，所述間充質干細胞培養上清液中包括濃度比為20％的血清替代物和無血清基礎培養基。

3.一種權利要1所述精華液的制備方法，其特征在于，該制備方法包括以下步驟：

制備間充質干細胞培養上清液；

按照權利要求1所述的組分比例，取定量的所述間充質干細胞培養上清液，分別加入還原型谷胱甘肽、殼聚糖、透明質酸鈉、維生素C、維生素E以及海藻膠原膠質，充分混勻后，在3-6℃的環境中靜置1.5-3小時。

4.根據權利要求3所述精華液的制備方法，其特征在于，所述制備間充質干細胞培養上清液的步驟包括：

臍帶的取樣及處理；

間充質干細胞原代培養；

間充質干細胞傳代培養；

間充質干細胞培養上清液的收集與處理。

5.根據權利要求4所述精華液的制備方法，其特征在于，所述臍帶的取樣及處理步驟包括：

按照預設的尺寸取新生兒臍帶；

用濃度為0.9％的生理鹽水清洗所述臍帶，將清洗后的所述臍帶在濃度為75％的酒精中浸泡2-3min，沿螺旋形剔除所述臍帶上的動脈和靜脈；

獲取所述臍帶上的華通膠，并使用生理鹽水清洗所述華通膠。

6.根據權利要求5所述精華液的制備方法，其特征在于，所述間充質干細胞原代培養步驟包括：

將清洗后的所述華通膠剪成多塊，加入無血清培養基混勻，置入37℃、5％CO₂培養箱中進行培養；

培養至第5天進行第一次換液，之后繼續培養；

培養至第9-10天進行第二次換液，之后繼續培養；

培養至第12天收獲P0細胞。

7.根據權利要求6所述精華液的制備方法，其特征在于，所述間充質干細胞傳代培養步驟包括：

用濃度為0.9％的生理鹽水洗滌所述P0細胞的細胞面，加入0.25％Trypsin-EDTA，置于37℃培養箱消化30s-1min，終止消化后，吹打細胞面將吹打后的細胞液用100μm的細胞篩過濾，之后加培養基離心棄上清液，加入細胞懸液搖晃使得細胞均勻分布，置入37℃、5％CO₂培養箱培養72h收獲P1代細胞；

當所述P1代細胞融合率達到80-90％時，對所述P1代細胞進行傳代培養，收集P4-P10代細胞培養液。

8.根據權利要求7所述精華液的制備方法，其特征在于，所述P1代細胞進行傳代培養的步驟中，所述傳代培養過程與所述P0細胞傳代得到所述P1代細胞的步驟相同。

9.根據權利要求7所述精華液的制備方法，其特征在于，所述間充質干細胞培養上清液的收集與處理步驟包括：

將所述P4-P10代細胞培養液離心，并通過100um的篩網去除底部離心沉淀，收集離心后的上清液；

將所述上清液在超濾器中過濾；

將所述在超濾器中過濾后的上清液除菌。

10.根據權利要求9所述精華液的制備方法，其特征在于，所述超濾器為回旋流/切向流超濾器。