[發明專利]多特異性單鏈抗體及其應用

在審

• 申請號: 202010522517.2
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN113773393A
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 黃朝峰;陳煥鵬;韋鳳嬌
• 申請（專利權）人: 廣州長峰生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/0783
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 戴志攀

1.一種用于從全血中分離T細胞的多特異性單鏈抗體，其特征在于，從N端到C端依次具有信號肽、第一抗體的可變區序列、第一連接肽和第二抗體的可變區序列，且不具有所述第一抗體和所述第二抗體的恒定區序列；所述第一抗體和所述第二抗體能夠分別特異性地結合T細胞的兩種表面標志抗原，所述可變區序列包括輕鏈可變區序列和重鏈可變區序列，所述輕鏈可變區序列和所述重鏈可變區序列之間通過第二連接肽連接。

2.根據權利要求1所述的多特異性單鏈抗體，其特征在于，所述第一抗體為CD3抗體，所述第二抗體為CD28抗體。

3.根據權利要求2所述的多特異性單鏈抗體，其特征在于，所述多特異性單鏈抗體的C末端還具有標簽序列。

4.根據權利要求3所述的多特異性單鏈抗體，其特征在于，所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述第一連接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述第二連接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述標簽序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

5.根據權利要求4所述的多特異性單鏈抗體，其特征在于，所述多特異性單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

6.一種表達基因，其特征在于，其能夠表達權利要求1～5任一項所述的多特異性單鏈抗體。

7.根據權利要求6所述的表達基因，其特征在于，其核酸序列如SEQ ID NO:6所示。

8.一種重組細胞，其特征在于，所述重組細胞中含有權利要求6或7所述的表達基因，或所述重組細胞的基因組整合有所述表達基因。

9.一種T細胞分離方法，其特征在于，包括以下步驟：在權利要求1～5任一項所述的多特異性單鏈抗體上標記第一標記物，然后與全血樣品混合得到混合液，利用能夠與所述第一標記物特異性結合的第二標記物從所述混合液中捕獲與所述多特異性單鏈抗體結合的T細胞。

10.根據權利要求9所述的T細胞分離方法，其特征在于，捕獲與所述多特異性單鏈抗體結合的T細胞的方法包括以下步驟：在所述混合液中加入第二標記物標記的磁珠，孵育后進行磁力分選，得到與所述多特異性單鏈抗體結合的T細胞。

11.根據權利要求9所述的T細胞分離方法，其特征在于，捕獲與所述多特異性單鏈抗體結合的T細胞的方法包括以下步驟：將所述混合液通過重力滴注的方式流過填充有所述第二標記物包被的細胞培養載體的細胞培養袋，用生理鹽水洗滌所述細胞培養袋，然后加入培養基進行培養。

12.一種T細胞分離試劑盒，其特征在于，包括權利要求1～5任一項所述的多特異性單鏈抗體、第一標記物和第二標記物，所述第一標記物和所述第二標記物能夠特異性結合。