[發明專利]一種地毯草黃單胞菌噬菌體及其組合物、試劑盒和應用

在審

• 申請號: 202010522150.4
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN111778216A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 肖逍;丁良;叢郁;徐旭凌;徐天舜;喬歡;何四龍
• 申請（專利權）人: 菲吉樂科（南京）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A01N63/40;A01P1/00
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 盛天亮

本發明屬于地毯草黃單胞菌的技術領域，具體涉及一種地毯草黃單胞菌噬菌體的應用。噬菌體為地毯草黃單胞菌噬菌體YHC5（Xanthomonas axonopodis phage YHC5），保藏編號為CCTCC NO:M 2018579；本發明的1株噬菌體對正常微生物菌群無毒害作用且其DNA無法編碼毒力基因，穩定性好，尤其在酸堿性較強的環境中仍能保持良好的穩定性，為開發新型抗菌制劑提供了優良菌種資源，具有良好的應用開發前景。

技術領域

本發明屬于地毯草黃單胞菌的研發技術領域，具體涉及一株耐酸耐堿、穩定性高的 地毯草黃單胞菌噬菌體及其應用。

背景技術

地毯草黃單胞菌，黃單胞菌屬，革蘭氏陰性細菌，菌體短桿狀，兩端鈍圓，大小 0.5～0.7×1.5～2.0μm，單個排列，鞭毛單根極生，不產生芽孢，有莢膜，氧化酶陰性，接 觸酶陽性。地毯草黃單胞菌在YDC培養基上呈表面光滑的黃色圓形菌落，邊緣整齊，粘稠， 并稍隆起。該細菌生長適宜溫度為20～30℃，最低5～10℃，最高35℃，致死溫度為55℃ 10分鐘，最適pH值為6.6。

地毯草黃單胞菌是導致柑橘潰瘍病的致病菌。柑橘潰瘍病在我國柑橘產區均有發生， 在湖南、浙江、福建、云南、江西、廣西、廣東、貴州等南方柑橘種植省份(區)發生較為普遍、在四川、重慶、湖北等省份(區)有局部零星分布。柑橘感染潰瘍病之后，在葉、枝、 果實上形成過山口狀的病斑，后期可造成落葉、落果，嚴重影響柑橘果實的產量和品質。 (林文力,肖伏蓮.柑橘潰瘍病菌檢測方法及防治技術研究進展[J].現代農業科技,2012(22):112- 114.)。

噬菌體是專門裂解細菌的一類病毒，主要化學成分由蛋白質和核酸組成，廣泛存在 于土壤、空氣、水及生物體中，具有較強的專一性，其通過與細菌細胞表面特異位點結合后 殺滅特異性細菌的病毒。自從Frederik Tword于1915年首次發現噬菌體以來，越來越多的 研究證明了噬菌體具有較高的抗菌活性和專一性，可防治耐藥性細菌并防止損傷微生物群落。 與抗生素治療相比，其副作用極低且更加快速有效，不會抑制機體的自然免疫或引起變態反 應，同時對人類、其他哺乳動物以及植物不具有侵染性及毒性。然而目前對噬菌體的研究僅 集中于篩選及生物特性的探討，對其應用方面鮮有報道。因此，篩選并應用合適的烈性噬菌 體，是研發新型抗菌制劑的一條有效途徑。

目前，關于地毯草黃單胞菌噬菌體的研究幾乎還是空白，噬菌體療法用于控制由地 毯草黃單胞菌引起的柑橘潰瘍病也一直沒有相關研究和報道。因此，對于開發地毯草黃單胞 菌噬菌體，用于相關病原菌的防治，具有積極的意義。

發明內容

本發明的目的一在于提供一株地毯草黃單胞菌噬菌體，其在酸堿環境下具備良好的 穩定性，是潛在的、優良的柑橘潰瘍病防治生物類制劑。

本發明的上述發明目的一是通過以下技術方案得以實現的：采用的一株地毯草黃單 胞菌噬菌體，所述地毯草黃單胞菌噬菌體為地毯草黃單胞菌噬菌體YHC5(Xanthomonasaxonopodis phage YHC5)，保藏編號為CCTCC NO:M 2018579。

進一步的，所述地毯草黃單胞菌噬菌體YHC5(Xanthomonas axonopodis phageYHC5) 具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

進一步的，所述地毯草黃單胞菌噬菌體YHC5(Xanthomonas axonopodis phageYHC5) 為烈性噬菌體，有一呈多面體對稱的頭部和可伸縮的尾部,屬于有尾噬菌體目短尾噬菌體科 噬菌體，基因組大小為43457bp。

進一步的，所述地毯草黃單胞菌噬菌體YHC5(Xanthomonas axonopodis phageYHC5) 在4～40℃條件下，在7天內效價降低不超過一個數量級；在pH3～pH11環境下，在7天內效價降低不超過一個數量級。