[發(fā)明專利]一種檢測(cè)血漿中阿維巴坦和頭孢他啶藥物濃度的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010513512.3
• 申請(qǐng)日: 2020-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN111638285A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 成曉亮;李美娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京品生醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 黃欣

1.一種檢測(cè)血漿中阿維巴坦和頭孢他啶藥物濃度的方法，其特征在于：取預(yù)處理的血漿，先利用超高效液相色譜將待測(cè)物與血漿基質(zhì)分離，再通過(guò)質(zhì)譜得到待測(cè)物與其對(duì)應(yīng)同位素內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)荷比，利用同位素內(nèi)標(biāo)定量法，根據(jù)已經(jīng)建立的校準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算出阿維巴坦和頭孢他啶的含量；

所述同位素內(nèi)標(biāo)物為阿維巴坦-13C5和頭孢他啶-d5；

所述預(yù)處理的血漿按照如下方法制備：向血漿中加入含內(nèi)標(biāo)的蛋白沉淀劑，振蕩離心后取上清液氮?dú)獯蹈桑尤爰状妓芤簭?fù)溶，再振蕩離心后取上清液進(jìn)樣檢測(cè)；

所述校準(zhǔn)曲線是以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的濃度比為X軸、標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為Y軸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述超高效液相色譜條件如下：

流動(dòng)相：流動(dòng)相A為0.01%~0.2%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈；

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18；

流速為0.2~0.4 mL/min，柱溫為30~50℃，進(jìn)樣體積為0.2~5 μL；

流動(dòng)相A和流動(dòng)相B為混合流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的初始比例為85~95:25~5，所梯度洗脫過(guò)程如下：在0~0.5分鐘內(nèi)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比保持在85~95:25~5，在0.5~2.5分鐘內(nèi)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比由85~95:25~5勻速漸變至60:40，在2.5~3.0分鐘內(nèi)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比由60:40勻速漸變至2:98，在3.0~5.0分鐘內(nèi)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比由2:98變至初始比例，每個(gè)樣品采集時(shí)間為5.0 分鐘。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的初始比例為90:10，流速為0.3 mL/min，柱溫為40℃，進(jìn)樣體積為1 μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述質(zhì)譜條件如下：

在電噴霧電離正負(fù)離子切換檢測(cè)模式下，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的質(zhì)譜掃描模式，噴霧電壓為ESI+ 3.0 kV、ESI- 2.5 kV，源溫度為150℃，霧化氣溫度為400℃，霧化氣流速為800 L/h，錐孔氣流速為150 L/h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述含內(nèi)標(biāo)的蛋白沉淀劑是將混合內(nèi)標(biāo)溶液加至蛋白沉淀劑后得到；

所述混合內(nèi)標(biāo)溶液是用甲醇配制的阿維巴坦-13C5和頭孢他啶-d5的混合溶液，阿維巴坦-13C5的濃度為10000ng/mL，頭孢他啶-d5的濃度為40000ng/mL；

所述蛋白沉淀劑是甲醇與乙腈混合溶液，甲醇與乙腈體積比為1-2:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：混合內(nèi)標(biāo)溶液和蛋白沉淀劑的體積比為1：99。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：預(yù)處理的血漿在制備過(guò)程中采用1%~50%甲醇水溶液復(fù)溶。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述預(yù)處理的血漿按照如下方法制備：取50 μL血漿中，向其中加入150 μL含內(nèi)標(biāo)工作的蛋白沉淀劑，振蕩3-10 min，在12000~15000r/min、10-20℃離心4~10 min，取100 μL上清，氮?dú)獯蹈桑尤?0 μL 10%甲醇水溶液復(fù)溶，振蕩2-5 min，12000~15000 rpm、10~20℃離心2-5 min，取上清進(jìn)樣。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述校準(zhǔn)曲線所采用的標(biāo)準(zhǔn)品濃度如下：

阿維巴坦的八個(gè)濃度點(diǎn)為依次為：10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、5000 ng/mL、10000 ng/mL、25000 ng/mL；

頭孢他啶的八個(gè)濃度點(diǎn)為依次為：40ng/mL、200ng/mL、400ng/mL、2000ng/mL、4000ng/mL、20000ng/mL、40000 ng/mL、100000 ng/mL。